跳轉至內容
Merck
首頁植物組織培養培養基製備 - 植物組織培養規範

培養基製備 - 植物組織培養規範

從包裝粉末中製備

粉末介質具有極強的吸濕性,必須避免受大氣中的濕氣影響。如果可能,每個包裝中的全部內容物都應在開封後立即使用。不建議以濃縮形式製備培養基,因為某些鹽複合物可能會沉澱。添加到培養基中的補充劑可能會影響保質期和儲存條件。製備培養基的基本步驟如下:

  1. 量出組織培養級水(產品編號 W 3500)最終所需容量的約 90%,例如 900 mL,最終容量為 1000 mL。
  2. 攪拌水的同時加入粉末培養基,攪拌至完全溶解。可能需要加熱使粉末進入溶液中。
  3. 用少量組織培養級水沖洗原始容器以去除粉末的痕跡。
  4. 加入所需的熱穩定補充劑(如蔗糖、膠凝劑、維生素、輔助素、細胞素等)
  5. 加入額外的組織培養級水,使培養基達到最終容量。
  6. 在攪拌的同時,使用 NaOH、HCl 或 KOH 將培養基調整至所需的 pH 值。
  7. 如果使用膠凝劑,則加熱至溶液變清。
  8. 根據您的應用,在高壓滅菌前(或後)將培養基分佈到培養器皿中。
  9. 在經過驗證的高壓滅菌器中以 1 kg/cm2 (15 psi)、121 °C 的溫度對培養基進行滅菌,滅菌時間請參照培養基滅菌方案。
  10. 使用前讓培養基冷卻。

粉末培養基及基本鹽混合物僅供實驗室使用。

不提供的材料

  • 去離子組織培養級水(產品編號 W3500)
  • 1 N 鹽酸 (HCl) (產品編號. H9892)
  • 1 N 氫氧化鈉(NaOH)(產品編號: S2770)

儲存

將乾燥的培養基存放在 0-5 °C的乾燥器中。粉末培養基的劣化可透過以下方式辨認:1) 顏色改變;2) 顆粒化、結團或粉末中含有微粒物質;3) 不溶性;4) pH 值改變;或 5) 在正確使用時無法促進生長。

培養基中的沉澱物

已知沉澱物會隨著時間在植物組織培養基中產生。已對沉澱物進行了分析(未發表的資料;Dalton 等人,1983 年)。它們是由淡黃白色的小顆粒組成。沉澱物的分析顯示以鐵、磷酸鹽和鋅為主。沉澱物的可能成因是亞鐵離子不可避免地氧化成鐵離子,以及未螯合的鐵離子的存在。當磷酸鐵的溶解度超標時就會產生沉澱。

從基礎鹽溶液中製備

為了您的方便,我們提供液體 10X 溶液。為了避免長期儲存時產生沉澱,我們配制了兩種溶液,將其適當稀釋混合後,就能形成具有適當鹽濃度的溶液。製備 1 公升培養基的基本步驟如下。注意:請勿對瓶中產品進行高壓消毒。

  1. 測量約 700 mL 的組織培養級水(產品編號 W3500)。
  2. 攪拌水的同時,加入 100 mL 的宏量營養素溶液。
  3. 繼續攪拌混合物,同時加入 100 mL 的微量營養素溶液。
  4. 加入所需的熱穩定補充劑(例如:蔗糖、膠凝劑、酵母)。
  5. 添加所需的熱穩定補充劑(如蔗糖、膠凝劑、維生素、輔助素、細胞素等)。
  6. 添加額外的組織培養級水,使培養基達到最終容量。
  7. 攪拌的同時,使用 NaOH、HCl 或 KOH 將培養基調整到所需的 pH 值。
  8. 如果使用膠凝劑,則加熱至溶液變清。
  9. 根據您的應用,在高壓滅菌前(或後)將培養基分佈到培養器皿中。
  10. 在經過驗證的高壓滅菌器中以 1 kg/cm2 (15 psi)、121 °C 的溫度對培養基進行滅菌,滅菌時間請參照培養基滅菌方案。
  11. 使用前讓培養基冷卻。

鹼性鹽溶液僅供實驗室使用。

不提供的材料

  • 去離子組織培養級水(產品編號 W3500)
  • 1 N鹽酸(產品編號 H9892)
    1. 基鹽溶液僅供實驗室使用,不得用於藥物、家用或其他用途。 H9892)

    2. 1 N 氫氧化鈉(產品編號: S2770)
    3. 所需的中等添加劑

儲存

基鹽溶液儲存於 0-5 °C。基礎鹽溶液的變質可透過以下方式辨識:1) 顏色改變;2) pH 值改變;3) 成分沉澱;或 4) 在正確使用時無法促進生長。

香蕉粉

產品編號 B4032

我們提供用於蘭花和其他植物細胞培養的香蕉粉。產品編號 B4032 是由香蕉和糊精的噴霧乾燥混合物製成的粉末。使用本產品時,添加量約為 40 g/L。為減少結塊,請在不斷攪拌下將粉末慢慢加入培養液中。在含有這兩種產品的培養基中,香蕉固體的存在是很常見的。

椰子水

產品編號。 C5915

椰子水已被證實可刺激多種植物的嫩芽增殖。椰子水是由精選的椰子製成,並經過處理以去除大部分的蛋白質。然後,產品會經過過濾消毒,並在出貨前冷凍。水中殘留的蛋白質含量可能因批次而異,並可能在產品冷凍時產生沉澱物。這種沉澱物應該不會影響植物組織的生長。沉澱物可以通過過濾或讓其沉澱到瓶底然後倒出來去除。椰子水可分成較小的等分份,與您的標準中等批量大小相對應,並重新冷凍,直到需要為止。椰子水的使用濃度應為 5-20% (v/v)。

材料
Loading
登入以繼續

若要繼續閱讀,請登入或建立帳戶。

還沒有帳戶?