微生物生長協議

大腸桿菌的培養 大腸桿菌

LB Broth (Miller) 是一種顆粒狀的培養基，適用於從小型培養到發酵的各種規模的大腸桿菌培養 大腸桿菌 。顆粒可確保在水中快速均勻地溶解，並防止培養基結塊和吸入空氣中的粉末。

Reagents	純 大腸桿菌 大腸桿菌。	LB - Miller	LB - Miller Plates		培養瓶，無菌

啟動培養

1. 從新鮮的條紋平板上挑取單個菌落，接種 3 至 5 mL 培養基的啟動培養物。
   
2. 使用適當的抗生素，並在 37 °C* 下培養約 8 小時，同時以 250-300 rpm 搖動。
   
3. 使用起始培養物接種隔夜培養物。在大口瓶中加入適當容量的培養基，以 1:500 至 1:1000 稀釋起始培養物，然後在 37 °C* 下培養 12 至 16 小時，同時以 250-300 rpm 搖動。有些細菌需要不同的培養溫度。

大腸桿菌的懸浮培養 E.大腸桿菌

1. 準備 LB 培養基，稱取適當的粉末培養基，加入無菌瓶中的水中
2. 將肉汁經高壓滅菌後冷卻至室溫（也可以使用即用型 LB 培養基）
   
3. 在層流室中，移取約 1 mL 過夜的大腸桿菌 。大腸桿菌 培養物移至燒瓶中
4. 用無菌棉塞（不吸水）封住燒瓶口；確保燒瓶不被緊封
5. 在 37° C 持續振動下培養過夜

Plating E.大腸桿菌

1. 稱取適當的粉末培養基、瓊脂和水至無菌燒瓶中，製備 LB 瓊脂
2. 將培養基進行自動滅菌器消毒，並冷卻至足以處理燒瓶
3. 在層流室中，將約 25-30 mL 的 LB 瓊脂倒入無菌平板
   
4. 讓平板在層流室中放置，蓋子稍微打開
   (平板也可以倒置存放在 4° C 以備將來使用)
   (或者，也可以使用即用型 LB 瓊脂平板)
   • 輕輕刮擦冷凍的 E.大腸桿菌甘油原液的表面
   • 用無菌接種環從有培養物的平板上挑起大腸桿菌菌落
   • 加入 10-100 µL E.大腸桿菌懸浮培養物，接種到 LB 瓊脂平板上
     • 將接種環橫向擠壓在 LB 瓊脂平板上
     • 用無菌玻璃擴展器將培養物撒滿整個平板
   • 用無菌玻璃擴展器將培養物撒滿整個平板
5. 倒置並在 37° C 孵育平板過夜

Advanced Protocols

Plating Bacteriophage M13

所需材料：

Reagents	純 E.大腸桿菌 培養	LB瓊脂EZMix™ (Product No.L7533)	IPTG（異丙基-β-D-硫代半乳糖苷） (Product No.I6758)	X-gal（產品編號.B9146)
氯化鎂

1. 將一個菌落接種到 5 mL 的 LB 或 YT 培養基中，製備大腸桿菌的純培養物。
2. 在無菌試管中製備添加了 5mM MgCl₂ 的 LB 瓊脂或 YT 培養基；在 47° C 下平衡；添加適量的 X-gal 和 IPTG 溶液。
3. 添加經序列稀釋的 M13 噬菌體原液 100 µL 的純細菌培養物；輕輕攪拌。
4. 將含有 X-gal 和 IPTG 的 LB 瓊脂或 YT 培養基倒入含有感染菌的試管中，輕輕攪拌混勻。
5. 讓平板凝固；倒轉平板並在 37° C 培養。
6. 在細菌生長的草坪上出現淡藍色的 M13 噬菌體斑塊。

以下是本公司提供的菌液成分：

Bacterial Broth Components	名稱	格式
Y0875	選擇酵母抽提物	N4767	N-Z-Amine® EKC
Y1626	精選酵母萃取物, EZMix™ 粉	EZMix™
T2559<	EZMix™ Tryptone

參考資料

1. Sambrook J, Fritsch E, Maniatis T. 1989. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press.

2. Parija S. 2009. Textbook of Microbiology and Immunology. Elsevier India.

3. Types of Growth Media Used to Culture Bacteria. [Internet].[updated 01 Aug 2016; cited 04 Aug 2020]. Available from: http://www.scienceprofonline.org/microbiology/types-culture-media-for-growing-bacteria