Polimeraza DNA Restorase^®

Nasza Restorase^® DNA Polymerase (R1028) jest specjalistycznym enzymem zaprojektowanym w celu ułatwienia naprawy i zapewnienia niezawodnej amplifikacji uszkodzonego DNA. Rozległe manipulacje DNA, które wynikają z zarchiwizowanych próbek, starzejących się próbek muzealnych lub próbek z ekstrakcji fenolem/chloroformem, powodują uszkodzenia, które zakłócają dokładną amplifikację podczas PCR. Restorase został opracowany dla naukowców, którzy nie byli w stanie osiągnąć amplifikacji uszkodzonych szablonów DNA przy użyciu innych dostępnych na rynku polimeraz DNA. Zdolność do przywracania uszkodzonego lub zdegradowanego DNA umożliwia badaczom pracę z uszkodzonymi szablonami, które w przeciwnym razie zostałyby porzucone.

Restorase^® DNA Polymerase, z buforem reakcyjnym 10x, łączy długą i dokładną technologię enzymatyczną Sigma z enzymem naprawczym DNA. Ta zoptymalizowana mieszanka zainicjuje naprawę i dalszą amplifikację uszkodzonych szablonów DNA większych niż 100 par zasad.

• Naprawa DNA uszkodzonego w wyniku ostrego traktowania lub długotrwałego przechowywania
• Przywrócenie amplifikacji zdegradowanego DNA
• Inicjacja naprawy uszkodzonego szablonu DNA o wielkości zaledwie 100 par zasad

Szablony DNA ulegają uszkodzeniu w wyniku ekspozycji na kwas, środki alkilujące, ciepło lub światło. Uszkodzenia te blokują progresję polimeraz DNA, wpływając w ten sposób na wydajność PCR. Restorase działa poprzez modyfikację uszkodzonych miejsc, umożliwiając polimeryzację i późniejsze kopiowanie szablonu. Restorase zapewnia nową możliwość amplifikacji szablonów, które w przeciwnym razie byłyby niemożliwe do amplifikacji.

Naprawa uszkodzonego DNA

Uszkodzenia matrycy DNA mogą wystąpić podczas niewłaściwego przechowywania, starzenia, zamrażania-rozmrażania lub ekspozycji na kwas, ciepło lub światło. Wpłynie to niekorzystnie na PCR, ponieważ uszkodzenie zablokuje postęp polimerazy DNA. Restorase naprawi uszkodzenia i przywróci amplifikację.

Rescue of formic acid damaged lambda template

Analiza żelu i sekwencji uratowanego DNA
DNA Lambda uszkadzano kwasem mrówkowym przez 7,5 lub 10 minut. Uszkodzone DNA amplifikowano za pomocą polimerazy DNA Taq lub Restorase^® polimerazy DNA. Uszkodzone DNA było również sekwencjonowane przed i po amplifikacji Restorase^® .

Pasy 1,2: Nieuszkodzone l DNA
Linie 3, 12: Marker PCR
Linie 4, 5: l DNA z 7,5 min kwasem mrówkowym, Taq
Linie 6, 7: l DNA z 7.5 min kwas mrówkowy, Restorase
Linie 8,9: l DNA z 10 min kwas mrówkowy, Taq
Linie 10,11: l DNA z 10 min kwas mrówkowy, Restorase

Badacze genetyczni, biolodzy ewolucyjni i naukowcy sądowi polegają na wysokiej jakości danych sekwencjonowania, aby dokładnie określić tożsamość, śledzić zmiany ewolucyjne w różnych pokoleniach i identyfikować mutacje genetyczne powodujące choroby. Poniższe dane pokazują odzyskiwanie uszkodzonego DNA przez Restorase^® aby umożliwić precyzyjną analizę sekwencjonowania, co jest jedną z najważniejszych zalet Restorase^®.

Analiza sekwencji l DNA uszkodzonego kwasem mrówkowym i amplifikowanego standardowym enzymem o wysokiej wierności

Analiza sekwencji tej samej matrycy uratowanej przez Restorase^® DNA Polymerase

Niezawodna amplifikacja uszkodzonego DNA

Amplifikacja 407 bp oksydazy cytochromowej została przywrócona z 30-letnich odnóży ćmy przy użyciu Restorase^® i innych dostępnych na rynku termostabilnych polimeraz.

Odzyskane 30-letnie archiwalne DNA ćmy

Amplifikacja oksydazy cytochromowej (407 bp) ze świeżych i 30-letnich odnóży ćmy przy użyciu Restorase^® i powszechnie stosowanych termostabilnych polimeraz.

Restorase^® preinkubacja była: 37 °C przez 20 minut, 72 °C przez 5 minut, 94 °C przez 2 minuty, a następnie dodanie starterów (4 °C) i amplifikacja. Wszystkie amplifikacje obejmowały 45 cykli 94 °C przez 5 sekund, 51 °C przez 30 sekund i 72 °C przez 60 sekund w buforach zalecanych przez dostawcę. Polimeraza Taq DNA (D1806) została użyta do amplifikacji kontroli świeżych odnóży ćmy.

DNA zostało wyizolowane przy użyciu GenElute™ Mammalian Genomic DNA Purification Kit (G1N10). Zarchiwizowana 30-letnia próbka muzealna była pojedynczą nogą ćmy, podczas gdy świeże DNA zostało wyizolowane z całej ćmy.

Zakupowi tego produktu towarzyszy ograniczona licencja na użytkowanie w procesie reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) wyłącznie do celów badawczych i w połączeniu z termocyklerem, którego użytkowanie w zautomatyzowanym procesie PCR jest objęte opłatą licencyjną z góry, w formie płatności na rzecz Applied Biosystems lub w formie zakupu, tj. i autoryzowanego termocyklera. Licencja udzielona na podstawie amerykańskiego patentu nr 5,436,149 należącego do Takara Shuzo Co., Ltd.

Restorase^® jest zastrzeżonym znakiem towarowym Sigma-Aldrich Corporation. Patent w toku.