Hot Start PCR

• Co to jest Hot Start PCR?
• Protokół Hot Start PCR
• Korzyści płynące z PCRKorzyści z Hot Start PCR, Nested PCR i Multiplex PCR
• KOD Hot Start DNA Polymerase and Master Mix
• FastStart™ Taq DNA Polymerase and High Fidelity PCR System
• JumpStart™ Taq ReadyMix™ i Taq DNA Polymerase
• AptaTaq™ Fast DNA Polymerase i AptaTaq™ Fast PCR Master

Co to jest Hot Start PCR?

Hot Start PCR to technika, która hamuje aktywność polimerazy Hot Start Taq lub włączanie zmodyfikowanych dNTP podczas ustawiania reakcji do momentu wystąpienia etapu aktywacji cieplnej. Hot Start PCR pozwala na ustawienie reakcji w temperaturze pokojowej bez niespecyficznej amplifikacji i tworzenia dimerów starterów. Podczas gdy konwencjonalny PCR jest często wykorzystywany do tworzenia wykładniczych kopii docelowej sekwencji DNA bez dodatkowego składnika aktywacji reakcji wrażliwego na temperaturę.

Reakcje PCR wymagają kilku krytycznych odczynników, w tym sekwencji matrycy do amplifikacji, dNTPS, buforów i polimerazy Taq DNA, aby enzymatycznie ułatwić włączenie dNTP i ostatecznie utworzyć nowe kopie sekwencji docelowej. Podstawową zasadą metod i odczynników Hot Start PCR jest to, że są one zaprojektowane tak, aby hamować aktywność polimerazy Taq DNA Hot Start lub włączanie zmodyfikowanych dNTP podczas ustawiania reakcji, aż do wystąpienia etapu aktywacji cieplnej. Dostępne są różne metody hamowania aktywności polimerazy Hot Start, w tym modyfikacja chemiczna, technologia wykorzystująca przeciwciała i technologia wykorzystująca aptamery. Aby uzyskać dodatkowe informacje, obejrzyj nasz film informacyjny Hot Start PCR video który dokładniej wyjaśnia technologię Hot Start PCR i sposób, w jaki może ona poprawić specyficzność docelową i wydajność.

Protokół Hot Start PCR

• Antibody-Mediated Hot Start PCR Protocol
• dNTP-Mediated Hot Start PCR Protocol

Korzyści z Hot Start PCR, Nested PCR i Multiplex PCR

Zalety metody Hot Start PCR obejmują wygodną konfigurację w temperaturze pokojowej bez niespecyficznej amplifikacji i tworzenia dimerów starterów, z których oba mogą zmniejszać specyficzność sekwencji docelowej i ogólną wydajność.Alternatywne metody PCR, takie jak zagnieżdżony PCR lub multipleksowy PCR, wykorzystują różne odczynniki i strategie w celu osiągnięcia specyficzności i wysokiej wydajności dla jednego lub więcej amplikonów. Nested PCR wykorzystuje dwa zestawy starterów, pierwszy zestaw flankuje sekwencje bezpośrednio poza sekwencją docelową dla pierwszej rundy amplifikacji. Drugi zestaw starterów jest specyficzny dla sekwencji docelowej z pierwszej rundy, która jest następnie wykorzystywana jako matryca do drugiej rundy PCR z użyciem zagnieżdżonych starterów. Multiplex PCR wykorzystuje wiele zestawów wysoce specyficznych starterów do amplifikacji wielu sekwencji docelowych jednocześnie podczas tej samej reakcji. Każda metoda PCR zapewnia szereg korzyści i powinna być wybrana w oparciu o konkretne potrzeby badacza.

KOD Hot Start DNA Polymerase and Master Mix

.KOD Hot Start DNA Polymerase to wstępnie zmieszany kompleks polimerazy DNA KOD, który wykorzystuje dwa wysoce specyficzne przeciwciała monoklonalne do hamowania aktywności egzonukleazy 3′→5′ w temperaturze pokojowej. Eliminując błędne primery i tworzenie się dimerów primerów, polimeraza DNA KOD Hot Start jest idealnym odczynnikiem do amplifikacji długich nici szablonów genomowego DNA (do 12 kb), plazmidów i szablonów DNA lambda (do 21 kb). Wykorzystując zoptymalizowany enzym do amplifikacji PCR długich i bogatych w GC szablonów, KOD Xtreme Hot Start DNA Polymerase z powodzeniem amplifikuje szablony z surowych lub trudnych do amplifikacji próbek, w tym tkanek roślinnych i końcówek ogonów myszy. Dodatkowo, nasz KOD Hot Start Master Mix zapewnia kompleksowe rozwiązanie, łącząc polimerazę DNA KOD Hot Start, dNTP i zoptymalizowany bufor reakcyjny w 2-krotnej gotowej do użycia mieszaninie.

KOD Hot Start Genomic and Lambda DNA Amplification

Rysunek po lewej stronie przedstawia amplifikację genomowego DNA przy użyciu polimerazy KOD Hot Start DNA ludzkiego genu łańcucha ciężkiego miozyny (8,4 kb) i ludzkiego genu β-globiny (12,3 kb). Rysunek po prawej stronie wskazuje, że DNA lambda zostało amplifikowane przy użyciu odpowiednich starterów i KOD Hot Start DNA Polymerase. M = Markery

Zakup KOD Hot Start DNA Polymerase & Master Mix: Użyj kodu SBJ przy kasie, aby zaoszczędzić 20%! Oferta kończy się 31 grudnia 2019 r. - ważna w wybranych krajach.*

FastStart™ Taq DNA Polymerase and High Fidelity PCR System

FastStart™ Taq DNA Polymerase jest idealna do amplifikacji Hot Start PCR pojedynczych celów i aplikacji multipleksowych. Dodatkowo, system FastStart™ High Fidelity PCR wykorzystuje mieszankę polimerazy DNA FastStart™ Taq i chemicznie zmodyfikowanego, termostabilnego białka korekcyjnego. Zarówno polimeraza FastStart™, jak i białko korekcyjne są nieaktywne w temperaturze poniżej 75 °C i aktywowane poprzez usunięcie grup blokujących po podgrzaniu do 95 °C przez zaledwie dwie minuty.

FastStart™ High Fidelity PCR System Amplification of Human Genomic DNA

Do amplifikacji fragmentu 4,8 kb genu tPA wykorzystano ludzkie genomowe DNA. System FastStart™ High Fidelity PCR wykazał wyższą czułość i specyficzność niż enzymy dwóch innych dostawców.

JumpStart™ Taq ReadyMix™ i Taq DNA Polymerase

.Wykorzystując hamowanie za pośrednictwem przeciwciał, JumpStart™ Taq Polymearse jest aktywowany dopiero po osiągnięciu przez reakcję temperatury 70 °C i odłączeniu się przeciwciała od enzymu. Kompleks przeciwciało-enzym pozwala na wygodną konfigurację w temperaturze pokojowej przy zmniejszonej niespecyficznej amplifikacji dla standardowego Hot Start PCR, qPCR i multipleksowego PCR. Dodatkowo, JumpStart™ Taq ReadyMix™ łączy w sobie te same cechy enzymów JumpStart™ ze wszystkimi pozostałymi składnikami potrzebnymi do PCR dostarczanymi przez mieszaninę reakcyjną ReadyMix™ PCR z opcjonalnym dodatkiem obojętnego barwnika obciążającego żel.

Aplifikacja fagów Lambda z JumpStart^™ REDTaq^® ReadyMix^™ Reaction Mix

200 ng DNA faga Lambda amplifikowano przy użyciu JumpStart REDTaq ReadyMix™ firmy Sigma (pasy nieparzyste) i konkurencyjnego Direct Load ReadyMix (pasy parzyste).

AptaTaq™ Fast DNA Polymerase i AptaTaq™ Fast PCR Master

.Podczas gdy alternatywne odczynniki Hot Start PCR wykorzystują metody oparte na przeciwciałach lub chemicznie zmodyfikowane polimerazy DNA Taq, AptaTaq™ Fast DNA Polymerase wykorzystuje technologię aptamerów w celu zahamowania niespecyficznej aplikacji podczas ustawiania reakcji w temperaturze pokojowej. Co więcej, AptaTaq™ Fast PCR Master w wygodny sposób zapewnia polimerazę Hot Start Taq z aptamerami i wszystkie odczynniki, z wyjątkiem matrycy DNA i starterów, dla szybkiego przygotowania reakcji i jeszcze krótszego czasu reakcji. Aktywowana w temperaturze powyżej 70 °C, AptaTaq™ Fast DNA Polymerase jest idealna do specyficznego primingu i szybkich aplikacji PCR.

PCR Amplification with AptaTaq™ Fast PCR Master

Reakcje PCR z użyciem AptaTaq™ Fast PCR Master sugerują lepszą amplifikację w porównaniu do konkurencyjnych mieszanek wzorcowych.