Protokół barwienia błękitem toluidyny dla wkładów hodowlanych Millicell^®

Błękit toluidyny jest podstawowym tiazynowym barwnikiem metachromatycznym, który wiąże się z materiałem jądrowym tkanek o wysokiej zawartości DNA i RNA i jest stosowany do selektywnego barwienia kwaśnych składników tkanek, takich jak karboksylany, siarczany i rodniki fosforanowe. Ten skuteczny środek barwiący jest stosowany do identyfikacji rozwoju i akumulacji macierzy chrząstki, proteoglikanów do izolacji i hodowli mezenchymalnych komórek macierzystych z kości zbitej myszy.

Materiały

• Płytki lub wkładki Millicell^®
• Milli-Q^® woda
• Millex^®- GP jednostka filtrująca (Nr produktu. SLGP033RS)
• Błękit toluidynowy (nr produktu 89640)
• 3% aldehyd glutarowy w soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS)
• Triton X-100, 0.5 % 

Metoda barwienia błękitem toluidyny

1. Przygotować 0.3% roztwór (w gramach) błękitu toluidyny w wodzie Milli-Q^®, wymieszać i przefiltrować przez filtr Millex^®-GP.
2. Wyjmij wkład Millicell^® z płytki i delikatnie przemyj PBS w celu usunięcia pożywki wzrostowej.
3. Utrwal komórki przez 15 minut 3% aldehydem glutarowym w PBS.
4. Delikatnie przepłucz wodą Milli-Q^®. Powtórzyć dwukrotnie.
5. Permeabilizować komórki 0,5% Tritonem X-100 przez 5 minut.
6. Delikatnie spłukać wodą Milli-Q^®. Powtórzyć dwukrotnie.
7. Nałożyć barwnik na apikalną stronę błony przez 30-60 sekund.
8. Obserwować jako mokry montaż.