G005597

Analiza HPLC strawu tryptycznego α-kazeiny na BIOshell A160 Peptide C18

application for HPLC

Właściwości

• metody: HPLC: suitable
• parametry testowe: sample/matrix: tryptic digested α-casein; column: BIOshell A160 Peptide C18, 5 cm x 4.6 mm I.D., 2.7 μm particles (66913-U); mobile phase: [A] 0.1% TFA in water; [B] 0.1% TFA in water:acetonitilre (10:90, A:B); gradient: 0-0.05 min, 0-20% B; 0.05-0.40 min, to 40% B; 0.40-0.50 min, to 50% B; 0.50-0.69 min, to 90% B; 0.69-0.70 min, to 0% B; held for 0.3 min; flow rate: 4 mL/min; column temp.: 35 °C; detector: UV, 215 nm; injection: 2 μL
• przydatność: application for HPLC
• Zastosowanie: life science and biopharma

Opis

Komentarz do analizy

Proteomika shotgun oparta na LC-MS opiera się zarówno na mocy technik separacji, jak i czułości metod detekcji. Jako realną alternatywę dla klasycznych podejść w tej dziedzinie, opracowaliśmy w pełni zautomatyzowany, kompleksowy system 2D LC, w którym RP LC x RP LC został po raz pierwszy połączony z detekcją MS i zastosowany do analizy tryptycznych strawów uzyskanych z a-kazeiny i defosforylowanej a-kazeiny. Zastosowanie znacznie różniącego się pH w obu wymiarach pozwoliło osiągnąć wysoką wydajność szczytową, pomimo zastosowania nowych identycznych faz stacjonarnych. Co więcej, taka kombinacja rozwiązuje kwestie kompatybilności, umożliwiając w ten sposób proste połączenie w konfiguracji 2D LC on-line, a także bezpośrednie połączenie ze spektrometrem mas. Teoretyczna wydajność szczytowa wynosząca około 8500 została obliczona dla konfiguracji wykorzystującej cztery szeregowo sprzężone kolumny C18 w pierwszym wymiarze (4 kolumny, każda o wymiarach 15 cm x 2,1 mm I.D., cząstki 2,7 μm), pracujące w warunkach zasadowych, oraz 3 cm długości tej samej fazy stacjonarnej (3 cm x 4,6 mm I.D., cząstki 2,7 μm), w warunkach kwaśnych do szybkiej analizy w drugim wymiarze.

Inne uwagi

Przygotowanie próbki: jedną dziesiątą grama α-kazeiny rozpuszczono w 10 ml 0,01 M buforu mrówczanu amonu, a pH dostosowano do 8,0 za pomocą wodorotlenku amonu; roztwór ogrzewano we wrzącej łaźni wodnej przez 6 minut. Po schłodzeniu roztworu dodano 2,0 mg trypsyny z trzustki bydlęcej i pozostawiono mieszaninę do przereagowania przez 4 godziny w temperaturze 37°C; reakcję wygaszono dodając 0,1% kwasu trifluorooctowego do pH 2. Roztwór przechowywano w temperaturze 4°C i przefiltrowano przed wstrzyknięciem przez nylonową membranę o grubości 0,45 μm.

Informacje prawne

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.