CAS9GEMP

Plazmid Cas9 Geminin

• NACRES: NA.51
• UNSPSC Code: 41106609
• Promoter: Promoter name: EF1-alpha
• Reporter gene: GFP

Właściwości

• recombinant: expressed in E. coli
• form: liquid
• packaging: vial of 50 μL
• concentration: 20 ng/μL in TE buffer; DNA (1μg of plasmid DNA)
• application(s): CRISPR
• promoter: Promoter name: EF1-alpha
• reporter gene: GFP
• selection: ampicillin
• shipped in: dry ice
• storage temp.: −20°C

Opis

General description

Ten produkt jest plazmidem ekspresyjnym, który wykorzystuje promotor EF1a do silnej przejściowej ekspresji fuzji Cas9-GFP-Geminina (EF1a-Cas9-GFP-Geminina), umożliwiając łatwą wizualizację udanej transfekcji. Plazmid ekspresyjny Cas9-Geminin jest jedną z części dwuczęściowego systemu CRISPR z indywidualnymi wektorami ekspresyjnymi Cas9-Geminin i gRNA.

Aby zamówić gRNA w dowolnym formacie kliknij tutaj.

Application

Genomika funkcjonalna/walidacja celu

• Przeprowadzanie ukierunkowanej integracji za pośrednictwem HDR w wielu liniach komórkowych
• Tworzenie linii komórkowych knock-in z promotorami, znacznikami fuzyjnymi lub reporterami zintegrowanymi z endogennymi genami

Biochem/physiol Actions

Systemy CRISPR/Cas są wykorzystywane przez bakterie i archeony do obrony przed inwazją wirusów i plazmidów. Niedawno system CRISPR/Cas typu II z bakterii Streptococcus pyogenes został zaprojektowany do funkcjonowania w systemach eukariotycznych przy użyciu dwóch składników molekularnych: pojedynczego białka Cas9 i niekodującego RNA (gRNA). Endonukleazę Cas9 można zaprogramować za pomocą pojedynczego gRNA, kierując dwuniciowe pęknięcie DNA (DSB) w pożądane miejsce genomu. Podobnie jak w przypadku DSB indukowanych przez nukleazy z palcem cynkowym (ZFN), komórka aktywuje następnie endogenne procesy naprawy DNA, albo niehomologiczne łączenie końców (NHEJ), albo naprawę ukierunkowaną homologicznie (HDR), aby wyleczyć docelowe DSB. Podczas gdy HDR jest nieobecny w G1, NHEJ jest aktywny przez cały cykl komórkowy i jest w dużej mierze preferowany w stosunku do HDR. W związku z tym HDR można zwiększyć poprzez bezpośrednią synchronizację ekspresji Cas9 z postępem cyklu komórkowego poprzez fuzję Cas9 z ludzką Gemininą (białko wyrażane w fazach S i G2). Białko fuzyjne Cas9-geminina reguluje następnie edycję genów poprzez promowanie naprawy w fazach S i G2, gdy zachodzi naprawa ukierunkowana homologicznie (HDR). Rezultatem jest tworzenie podwójnych pęknięć nici w komórkach, które są bardziej zdolne do włączenia sekwencji dawcy.

Features and Benefits

• Wysoka specyficzność i aktywność
• Zweryfikowana sekwencja
• Gotowy do użycia oczyszczony plazmid DNA

Legal Information

LicencjaCRISPR.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Klasa składowania: 12 - Non Combustible Liquids
• wgk: WGK 2
• flash_point_f: Not applicable
• flash_point_c: Not applicable