CAS9GEMP

Plazmid Cas9 Geminin

• Kod UNSPSC: 41106609
• NACRES: NA.51

Właściwości

• rekombinowane: expressed in E. coli
• Formularz: liquid
• opakowanie: vial of 50 μL
• stężenie: 20 ng/μL in TE buffer; DNA (1μg of plasmid DNA)
• Zastosowanie: CRISPR
• Promotor: Promoter name: EF1-alpha
• gen reporterowy: GFP
• Wybór: ampicillin
• Warunki transportu: dry ice
• temp. przechowywania: −20°C

Opis

Opis ogólny

Ten produkt jest plazmidem ekspresyjnym, który wykorzystuje promotor EF1a do silnej przejściowej ekspresji fuzji Cas9-GFP-Geminina (EF1a-Cas9-GFP-Geminina), umożliwiając łatwą wizualizację udanej transfekcji. Plazmid ekspresyjny Cas9-Geminin jest jedną z części dwuczęściowego systemu CRISPR z indywidualnymi wektorami ekspresyjnymi Cas9-Geminin i gRNA.

Aby zamówić gRNA w dowolnym formacie kliknij tutaj.

Zastosowanie

Genomika funkcjonalna/walidacja celu

• Przeprowadzanie ukierunkowanej integracji za pośrednictwem HDR w wielu liniach komórkowych
• Tworzenie linii komórkowych knock-in z promotorami, znacznikami fuzyjnymi lub reporterami zintegrowanymi z endogennymi genami

Cechy i korzyści

• Wysoka specyficzność i aktywność
• Zweryfikowana sekwencja
• Gotowy do użycia oczyszczony plazmid DNA

Zasada

Systemy CRISPR/Cas są wykorzystywane przez bakterie i archeony do obrony przed inwazją wirusów i plazmidów. Niedawno system CRISPR/Cas typu II z bakterii Streptococcus pyogenes został zaprojektowany do funkcjonowania w systemach eukariotycznych przy użyciu dwóch składników molekularnych: pojedynczego białka Cas9 i niekodującego RNA (gRNA). Endonukleazę Cas9 można zaprogramować za pomocą pojedynczego gRNA, kierując dwuniciowe pęknięcie DNA (DSB) w pożądane miejsce genomu. Podobnie jak w przypadku DSB indukowanych przez nukleazy z palcem cynkowym (ZFN), komórka aktywuje następnie endogenne procesy naprawy DNA, albo niehomologiczne łączenie końców (NHEJ), albo naprawę ukierunkowaną homologicznie (HDR), aby wyleczyć docelowe DSB. Podczas gdy HDR jest nieobecny w G1, NHEJ jest aktywny przez cały cykl komórkowy i jest w dużej mierze preferowany w stosunku do HDR. W związku z tym HDR można zwiększyć poprzez bezpośrednią synchronizację ekspresji Cas9 z postępem cyklu komórkowego poprzez fuzję Cas9 z ludzką Gemininą (białko wyrażane w fazach S i G2). Białko fuzyjne Cas9-geminina reguluje następnie edycję genów poprzez promowanie naprawy w fazach S i G2, gdy zachodzi naprawa ukierunkowana homologicznie (HDR). Rezultatem jest tworzenie podwójnych pęknięć nici w komórkach, które są bardziej zdolne do włączenia sekwencji dawcy.

Informacje prawne

LicencjaCRISPR.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Kod klasy składowania: 12 - Non Combustible Liquids
• Klasa zagrożenia wodnego (WGK): WGK 2
• Temperatura zapłonu (°F): Not applicable
• Temperatura zapłonu (°C): Not applicable