S7707

Zestaw do wykrywania telomerazy TRAPeze^™ XL

• UNSPSC Code: 12161503
• NACRES: NA.84
• eCl@ss: 32161000

Właściwości

• species reactivity: mammals
• Quality Level: 100
• technique(s): PCR: suitable
• application(s): genomic analysis

Opis

General description

Opracowanie czułej i skutecznej metody wykrywania aktywności telomerazy opartej na PCR, TRAP (Telomeric Repeat Amplification Protocol)(15, 22), umożliwiło przeprowadzenie badań aktywności telomerazy w ludzkich komórkach i tkankach na dużą skalę (15, 23-29). Do tej pory aktywność telomerazy wykryto w ponad 85% wszystkich badanych guzów obejmujących ponad 20 różnych typów nowotworów (30-31).
Zestaw TM=["TRAPEZE"] XL jest wysoce czułym testem in vitro do fluorometrycznego wykrywania aktywności telomerazy. Zawiera udoskonalenia oryginalnego testu TRAP, które zostały po raz pierwszy wprowadzone w opartym na żelu zestawie TM=["TRAPEZE"] Telomerase Detection Kit (nr kat. S7700). Podobnie jak w oryginalnym zestawie TM=["TRAPEZE"], uwzględniono modyfikacje sekwencji starterów, które zmniejszają artefakty amplifikacji oraz wewnętrzną kontrolę PCR. Ponadto, zestaw TM=["TRAPEZE"] XL wykorzystuje startery do transferu energii fluorescencji (ET) do generowania fluorescencyjnie znakowanych produktów TRAP, które umożliwiają nieizotopową, ilościową analizę aktywności telomerazy.
Unikalna konstrukcja tych starterów ET (startery TM=["Amplifluor"]) umożliwia wykrywanie i kwantyfikację aktywności telomerazy poprzez bezpośredni pomiar emisji fluorescencji w naczyniach reakcyjnych. Ponieważ startery TM=["Amplifluor"] będą fluoryzować tylko po włączeniu do produktów TRAP lub kontroli wewnętrznej, manipulacje próbkami po PCR, takie jak żel elektroforetyczny lub analizy ELISA, są wyeliminowane, zmniejszając w ten sposób ryzyko przeniesienia zanieczyszczeń. Analiza ilościowa nie jest zagrożona, gdy wykrywanie odbywa się w wysokowydajnym 96-dołkowym formacie, w przeciwieństwie do platform wykorzystujących jakościowy test ELISA. Ponadto, włączenie kontroli wewnętrznej znakowanej drugim fluoroforem służy zarówno do monitorowania amplifikacji PCR, jak i pomaga w ilościowym określeniu aktywności telomerazy.

TRAPeze XL Telomerase Detection Kit to jednorodny test fluorescencyjny do szybkiego i czułego pomiaru aktywności telomerazy w ekstraktach komórkowych i tkankowych. Zestaw TRAPeze XL wykorzystuje nowe startery znakowane fluorescencyjnym transferem energii Amplifluor w oryginalnej reakcji zestawu TRAPeze Telomerase Detection Kit, dzięki czemu pomiary ilościowe uzyskuje się bez radioaktywności. Dodatkowo, unikalna konstrukcja starterów Amplifluor umożliwia jednorodną amplifikację sygnału i kwantyfikację bezpośrednio w nieotwartym naczyniu PCR. Format testu z zamkniętą probówką eliminuje ryzyko zanieczyszczenia nieprzetworzonych próbek amplikonem PCR. Procedura zestawu TRAPeze XL Telomerase Detection Kit nie wymaga manipulacji po PCR, takich jak żele lub testy immunoenzymatyczne (ELISA).

Zalecane polimerazy Taq: nie mogą być odporne na odczyt, nie mogą mieć aktywności egzonukleazy i muszą być zdolne do "gorącego startu". Sugerowane są Titanium Taq, Platinum Taq.

Telomery to specyficzne struktury znajdujące się na końcu chromosomów u eukariontów. W ludzkich chromosomach telomery składają się z tysięcy kopii 6-zasadowych powtórzeń (TTAGGG)(1-3). Sugeruje się, że telomery chronią końce chromosomów, ponieważ uszkodzone chromosomy pozbawione telomerów ulegają fuzji, rearanżacji i translokacji (2). W komórkach somatycznych długość telomerów jest stopniowo skracana z każdym podziałem komórki zarówno in vivo, jak i in vitro (4-7) z powodu niezdolności kompleksu polimerazy DNA do syntezy samego 5′ końca opóźnionej nici (8,9).
Telomeraza jest rybonukleoproteiną, która syntetyzuje i kieruje powtórzenia telomeryczne na 3′ koniec istniejących telomerów, wykorzystując swój składnik RNA jako szablon (10-14). Wykazano, że aktywność telomerazy ulega specyficznej ekspresji w komórkach nieśmiertelnych, nowotworowych i zarodkowych (15,16), gdzie kompensuje skracanie telomerów podczas replikacji DNA, a tym samym stabilizuje długość telomerów (7,17). Obserwacje te doprowadziły do hipotezy, że długość telomerów może funkcjonować jako "zegar mitotyczny", który wyczuwa liczbę podziałów komórkowych i ostatecznie sygnalizuje starzenie replikacyjne lub zaprogramowaną śmierć komórki po osiągnięciu krytycznej długości telomerów. Dlatego też ekspresja aktywności telomerazy w komórkach nowotworowych może być koniecznym i niezbędnym etapem rozwoju i progresji nowotworu (16,18-20). Związek przyczynowy między ekspresją telomerazy a stabilizacją długości telomerów i wydłużeniem żywotności ludzkiej komórki został niedawno opisany (21).

Preparation Note

Środki ostrożności 1. Ponieważ zestaw do wykrywania telomerazy TRAPEZE^™ XL wykrywa aktywność telomerazy, rybonukleoproteiny wrażliwej na RNazę, a nie tylko obecność RNA lub białkowych składników telomerazy, test wymaga enzymatycznie aktywnych próbek komórek lub tkanek. Ponadto, ze względu na czułość testu TRAPEZE^™ XL Kit, który może wykryć aktywność telomerazy w bardzo małej liczbie komórek, wymagana jest specjalna konfiguracja laboratoryjna i znaczne środki ostrożności, aby zapobiec zanieczyszczeniu PCR i zanieczyszczeniu RNazą. Te środki ostrożności zostały szczegółowo omówione w Rozdziale V. Dodatek, Konfiguracja laboratorium i środki ostrożności oraz Konfiguracja stanowiska zestawu do wykrywania telomerazy TRAPEZE^™ XL (Obszar 1). 2. Wyłącznie do użytku badawczego. Nie do użytku w procedurach diagnostycznych.

Other Notes

CHAPS Lysis Buffer (13.5 mL) 5X TRAPEZE^™ XL Reaction Mix (1.12 mL) TS primer RP Amplifluor^® primer K2 Amplifluor^® primer TSK2 template dA, dC, dG and dTTP diluted in : 100 mM Tris-HCl, pH 8.3 7.5 mM MgCl2 315 mM KCl 0.25% TWEEN^® 20 5 mM EGTA 0.5 mg/mL BSA PCR - Grade Water (8.2 mL) protease, DNase, and RNase-free; deionized TSR8* (control template) (45 µL) 0.2 amole/µL TSR8 template Control Cell Pellet Telomerase positive cells (106 cells) * Caution - refer to Sec. II. Kit Components, Precautions.

Legal Information

Amplifluor is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

TRAPEZE is a trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

TWEEN is a registered trademark of Croda International PLC

Disclaimer

O ile nie określono inaczej w naszym katalogu lub innej dokumentacji firmy dołączonej do produktu(-ów), nasze produkty są przeznaczone wyłącznie do użytku badawczego i nie mogą być wykorzystywane do żadnych innych celów, w tym między innymi do nieautoryzowanych zastosowań komercyjnych, zastosowań diagnostycznych in vitro, zastosowań terapeutycznych ex vivo lub in vivo lub jakiegokolwiek rodzaju konsumpcji lub zastosowania u ludzi lub zwierząt.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• pictograms: GHS05
• signalword: Warning
• hcodes: H290
• pcodes: P234 - P390
• Hazard Classifications: Met. Corr. 1
• wgk: WGK 3
• flash_point_f: Not applicable
• flash_point_c: Not applicable
• Klasa składowania: 10 - Combustible liquids