NS340

Milli-Mark^® ChromaPan Neuronal Marker-ORC

Milli-Mark ChromaPan Neuronal Marker-ORC is an antibody targeting the ORC protein, validated for use in ICC & IF.

• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.41
• eCl@ss: 32160702
• Clone: polyclonal
• Species reactivity: human, mouse, rat
• Application: ICC, IF
• Citations: -

Właściwości

• clone: polyclonal
• Quality Level: 100
• species reactivity: human, mouse, rat
• manufacturer/tradename: Milli-Mark^®
• technique(s): immunocytochemistry: suitable, immunofluorescence: suitable
• shipped in: wet ice

Opis

General description

Milli-Mark ChromaPan Neuronal Marker-ORC to kompletna wielogatunkowa mieszanka przeciwciał neuronalnych z otwartym kanałem króliczym (ORC), który specyficznie wykrywa aksony, dendryty i ciała komórek z różnymi fluoroforami. Mieszanka wielogatunkowych przeciwciał pierwotnych nie zawiera króliczego IgG; pozwala to badaczowi na kolokalizację własnego króliczego IgG (przeciwko białku docelowemu) z cytoarchitekturą neuronów.

Przeciwciała przeciwko białkom neuronalnym stały się kluczowymi narzędziami do identyfikacji neuronów i rozróżniania cech morfologicznych w hodowli i złożonej tkance. Przeciwciała specyficzne dla neuronów są wygodnymi, precyzyjnymi narzędziami przydatnymi w ujawnianiu cytoarchitektury, ale są ograniczone do docelowej dystrybucji białka w neuronie, która może się znacznie różnić w zależności od jądra, somy, dendrytu i aksonu. Aby uzyskać jak najpełniejsze barwienie morfologiczne we wszystkich częściach neuronów, firma Millipore opracowała wielogatunkową mieszankę przeciwciał pierwotnych, która reaguje z kluczowymi białkami somatycznymi, dendrytycznymi i aksonalnymi rozmieszczonymi w całej architekturze neuronów, które mogą być następnie wykrywane przez pojedynczą wielogatunkową mieszankę przeciwciał wtórnych zawierającą dyskretne fluorofory. W rezultacie różne cechy morfologiczne (somatyczne, dendrytyczne i aksonalne) są podświetlane w różnych kolorach: Cytoarchitektura somato-dendrytyczna jest wykrywana za pomocą sprzężonego przeciwciała wtórnego DyLight 488, a cytoarchitektura somato-aksonalna jest wykrywana za pomocą sprzężonego przeciwciała wtórnego DyLight 649. Mieszanka przeciwciał pierwotnych nie zawiera żadnych króliczych IgG. Badacz może dodać królicze IgG przeciwko swojemu białku docelowemu, które można wykryć za pomocą drugorzędowej mieszanki przeciwciał dostarczonej przez drugorzędowe przeciwciało sprzężone z cyjaniną 3 przeciwko króliczym IgG. Ten koktajl przeciwciał pan-neuronalnych został zwalidowany w różnych hodowlach komórkowych i tkankowych, dając badaczom wygodne i specyficzne narzędzie jakościowe i ilościowe do badania morfologii neuronów.

Immunogen

Epitop: Marker całego neuronu

Application

Protokół immunocytochemii
1. Hodować neurony zgodnie z życzeniem. Gotowe komórki delikatnie przemyć PBS i utrwalić 4% paraformaldehydem w PBS przez 5-15 minut w temperaturze pokojowej (RT).
2. Przemyć PBS, 3 x po 5 minut, w temperaturze pokojowej (RT) i zablokować 1-krotnym buforem blokującym na 1 godzinę w temperaturze pokojowej (RT).
Uwaga: Dostarczony bufor blokujący jest dostarczany jako koncentrat 5X. Rozcieńczyć koncentrat do stężenia 1X za pomocą wody Milli-Q. Na przykład dodać 20 ml wody Milli-Q do 5 ml 5-krotnego buforu blokującego.
3. Inkubować komórki z mieszaniną wielogatunkowych przeciwciał pierwotnych ChromaPan przez 2 godziny w temperaturze RT (rozcieńczyć przeciwciało w stosunku 1:125 do 1:250 w buforze blokującym). Optymalne stężenia robocze muszą zostać określone przez użytkownika końcowego.
Opcjonalnie: Do mieszaniny pierwotnych przeciwciał ChromaPan można również dodać królicze IgG przeciwko białku docelowemu. Optymalne warunki pracy muszą zostać określone przez użytkownika końcowego. W przypadku dodania króliczej IgG pominąć krok 4.
4. Przemyć PBS, 3 x po 5 minut i inkubować komórki z króliczą IgG przeciwko białku docelowemu. Optymalne warunki pracy muszą zostać określone przez użytkownika końcowego.
5. Przemyć PBS, 3 x po 5 minut i inkubować komórki z mieszaniną wielogatunkowych przeciwciał drugorzędowych (1:150 w buforze blokującym) przez 1 godzinę w RT (zweryfikowane za pomocą Chroma Pan w celu uzyskania minimalnego tła). Optymalne stężenia robocze muszą zostać określone przez użytkownika końcowego.
Opcjonalnie: Do mieszaniny drugorzędowej można również dodać DAPI (1:1000). W przypadku dodania DAPI pominąć krok 6.
6. Przepłukać PBS, 3 x po 5 minut i inkubować komórki z DAPI (1:1000 w buforze blokującym) przez 5 minut w RT. Optymalne stężenia robocze muszą zostać określone przez użytkownika końcowego.
7. Przemyć PBS, 3 x po 5 minut, i przykryć szkiełkiem z płynem montażowym LIGHT DIAGNOSTICS (nr katalogowy #5013). Oglądać przy użyciu mikroskopu fluorescencyjnego z odpowiednim filtrem.

Research Category
Neuroscience

Research Sub Category
Neuronal & Glial Markers

Biochem/physiol Actions

Reaktywność z innymi gatunkami nie została określona.

NS340 jest specyficzny dla aksonów, dendrytów, w tym kolców i ciała komórkowego neuronów.

Physical form

Format: Oczyszczony

Mieszany koktajl przeciwciał poliklonalnych w PBS z 0,05% _NaN3.

Preparation Note

Przechowywać w temperaturze 2-8°C przez okres do 6 miesięcy od daty otrzymania.

Analysis Note

Kontrola
Neurony korowe

Routinely tested on rat E18 cortex primary neurons in Immunocytochemistry 1:150 - 1:100.

Other Notes

1) 5X Blocking Buffer (Part No. CS204291): 5 ml of an optimized blocking buffer is provided and contains PBS, BSA, serum, trition X-100, and 0.05% azide. Store at 2-8°C.

2) Multi-species Primary Antibody blend (ORC) (Part No. CS204300): 100uL of a proprietary antibody blend with host specific antibodies that reacts against key somatic, nuclear, dendritic and axonal targets. It does not contain rabbit IgG. Presented in PBS containing 0.05% azide. Store at 2-8°C.

3) Multi-species Secondary Antibody blend (Part No. CS204289): 100 µL of a secondary antibody blend containing host specific IgG antibodies against mouse, rabbit, and chicken, conjugated to DyLight 488, cyanine 3, and DyLight 649 dyes respectively. Each individual set has been species absorbed against H, R, B, Gt, Sh, Gp, Eq and/or M, Rb, Ch to minimize background and cross reactivity. Presented in 0.01M Sodium Phosphate, 0.25M NaCl, pH 7.6 with 15 mg/mL BSA, and 0.05% sodium azide. Store at 2-8°C, away from light.

4) DAPI (Part No. CS202687): Vial contains 10 µL of 0.1mg/mL of DAPI. Store at 2-8°C, away from light.

Legal Information

MILLI-MARK is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Unless otherwise stated in our catalog or other company documentation accompanying the product(s), our products are intended for research use only and are not to be used for any other purpose, which includes but is not limited to, unauthorized commercial uses, in vitro diagnostic uses, ex vivo or in vivo therapeutic uses or any type of consumption or application to humans or animals.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• pictograms: GHS07
• signalword: Warning
• hcodes: H319,H412
• pcodes: P264 - P273 - P280 - P305 + P351 + P338 - P337 + P313 - P501
• Hazard Classifications: Aquatic Chronic 3 - Eye Irrit. 2
• Klasa składowania: 12 - Non Combustible Liquids
• flash_point_f: Not applicable
• flash_point_c: Not applicable