HTS004M

Przygotowanie membrany ChemiSCREEN CXCR4

Human CXCR4 GPCR membrane preparation for Radioligand binding Assays & GTPgammaS binding.

• Kod UNSPSC: 41106514
• eCl@ss: 32161000
• NACRES: NA.84

Właściwości

• pochodzenie biologiczne: human
• Poziom jakości: 100
• rekombinowane: expressed in Chem-1 cells
• opakowanie: pkg of 2 mL
• producent / nazwa handlowa: ChemiScreen; Chemicon^®
• stężenie: 0.5 mg/mL
• metody: ligand binding assay: suitable (GTPγS); radioligand binding assay (RLBA): suitable
• numer dostępu NCBI: NM_001008540.1; NM_003467.2
• numer dostępu UniProt: P61073
• Warunki transportu: dry ice
• informacje o genach: human ... CXCR4(7852)

Opis

Opis ogólny

Chemokina SDF-1a i jej receptor GPCR CXCR4 mają specyficzność jeden do jednego, która jest unikalna wśród chemokin i ich receptorów. SDF-1a wiąże się z CXCR4 wyrażonym na komórkach krwiotwórczych i limfopoetycznych i kieruje ich przemieszczaniem się i zatrzymywaniem w narządach krwiotwórczych i limfatycznych oraz w miejscach zapalenia (Kucia i in., 2004). CXCR4 ulega ekspresji w kilku liniach komórek nowotworowych i może być odpowiedzialny za przerzuty do miejsc ekspresji SDF-1a, takich jak kości i węzły chłonne (Muller i in., 2001). Ponadto, CXCR4 jest koreceptorem dla glikoproteiny otoczki wirusa HIV gp120 (Feng et al., 1996). Opracowano małocząsteczkowych antagonistów CXCR4 i wykazano, że hamują one zakaźność T-tropowych szczepów HIV i osłabiają wzrost guzów mózgu (Arakaki i in., 1999; Rubin i in., 2003). Preparaty błonowe CXCR4 firmy Chemicon są surowymi preparatami błonowymi wykonanymi z naszych zastrzeżonych stabilnych rekombinowanych linii komórkowych w celu zapewnienia wysokiego poziomu ekspresji powierzchniowej GPCR; dlatego są idealnymi narzędziami do badań przesiewowych w kierunku antagonistów interakcji między CXCR4 i SDF-1a. Znakowany radioaktywnie SDF-1a wiąże się z błonami CXCR4 z Kd wynoszącym 0,9 nM. Przy 0,04-0,13 nM znakowanego 125I SDF-1a uzyskuje się około 3-krotne okno specyficznego wiązania.

Pełnej długości ludzki cDNA CXCR4

Zastosowanie

Test wiązania radioligandu i wiązanie GTPgammaS.

Działania biochem./fizjol.

Protein Target: CXCR4

Jakość

Table 1. Signal:background and specific binding values obtained in a competition binding assay with CXCR4 membrane prep, 0.13 nM ¹²⁵I-SDF-1α and a dilution series of unlabeled SDF-1α.

	5 µg/well
Signal:Background	4.9
Specific Binding (cpm)	9004

Specifications:
1 unit = 5 μg
Bmax [¹²⁵I]-SDF-1alpha binding: 1.6 pmol/mg protein
Kd for [¹²⁵I] SDF-1alpha binding: ~ 0.9 nM

Charakterystyka techniczna

Warunki inkubacji
ZALECANE WARUNKI BADAŃ: Membrany miesza się z radioaktywnym ligandem i nieznakowanym konkurentem (patrz rysunki 1 i 2 dla badanych stężeń) w buforze wiążącym w niewiążącej 96-dołkowej płytce i inkubuje przez 1-2 h. Przed filtracją 96-dołkowa płytka filtracyjna GF/C jest powlekana 0,33% polietylenoiminą przez 30 minut, a następnie przemywana 50 mM HEPES, pH 7,4, 0,5% BSA. Reakcja wiązania jest przenoszona na płytkę filtracyjną i przemywana 3 razy (1 ml na studzienkę na przemywanie) buforem do przemywania. Płytka jest suszona i liczona.

Bufor wiążący: 50 mM Hepes, pH 7,4, 5 mM MgCl2, 1 mM CaCl2, 0,2% BSA, filtrowany i przechowywany w temperaturze 4°C.

Radioligand: [125I] SDF-1alfa (PerkinElmer#: NEX346)

Bufor płuczący: 50 mM Hepes, pH 7,4, 500 mM NaCl, 0,1% BSA, filtrowany i przechowywany w temperaturze 4°C.

Jedna fiolka zawiera wystarczającą ilość membran na co najmniej 200 testów (jednostek), gdzie jednostka to ilość membrany, która da ponad 4-krotny stosunek sygnału do tła ze ^{znakowanym 125I}SDF-1alfa przy 0,13 nM.

Postać fizyczna

Bufor opakowaniowy: 50 mM Tris pH 7,4, 10% glicerol i 1% BSA

Metoda pakowania: Białko membranowe dostosowano do 0,5 mg/ml w 1 ml buforu do pakowania, szybko zamrożono i przechowywano w temperaturze -80°C.

Informacje prawne

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Kod klasy składowania: 12 - Non Combustible Liquids
• Klasa zagrożenia wodnego (WGK): WGK 2
• Temperatura zapłonu (°F): Not applicable
• Temperatura zapłonu (°C): Not applicable