2145
Zestaw do ekstrakcji białek z komory
Zaloguj się, aby wyświetlić ceny organizacyjne i kontraktowe.
Wybierz wielkość
Informacje o tej pozycji
eCl@ss:
32160405
UNSPSC Code:
41116012
NACRES:
NA.32
Pomoc techniczna
Potrzebujesz pomocy? Nasz zespół doświadczonych naukowców chętnie Ci pomoże.
Pozwól nam pomócPomoc techniczna
Potrzebujesz pomocy? Nasz zespół doświadczonych naukowców chętnie Ci pomoże.
Pozwól nam pomóctechnique(s)
protein extraction: suitable
application(s)
sample preparation
Preparation Note
Przechowywać bufory C, W, N, M i CS w temperaturze 2-8°C przez okres do 12 miesięcy od daty otrzymania. Bufor 50X PI należy przechowywać w temperaturze -20°C w nierozcieńczonych podwielokrotnościach przez okres do 12 miesięcy od daty otrzymania. Unikać powtarzających się cykli zamrażania/rozmrażania.
Application
Białka cytoszkieletu znajdują się w roztworze mieszanym. <br /><br />10. Zmierzyć stężenia białek w czterech frakcjach. Oddzielić i odpowiednio oznaczyć białka i przechowywać w temperaturze -70°C. <br /><br />* Zalecamy użycie homogenizatora IKA Ultra Turrax T25 Basic lub podobnego modelu do tkanek. Można również użyć homogenizatora ręcznego; celem homogenizacji jest uzyskanie całkowitej lizy tkanki bez naruszania przedziału jądrowego. Homogenizacja komórek może nie być konieczna; zwykle wystarczające jest pipetowanie w górę i w dół komórek i uzyskanie ich dobrej zawiesiny. <br /><br />** Etap dializy może być konieczny, jeśli frakcja jądrowa ma być użyta do testu przesunięcia ruchliwości w żelu. <Rozwiązywanie problemów: <br /><br />1. Białka cytoplazmatyczne - przenoszenie do frakcji jądrowej i błonowejPowtórz etap płukania (krok 3 w protokole) 1-2 razy, aby całkowicie usunąć białka cytoplazmatyczne. Dodaj etap płukania bezpośrednio po ekstrakcji białek jądrowych. <br /><br />2. Białka jądrowe obecne we frakcji cytoplazmatycznejWarunki homogenizacji tkanki były zbyt surowe, a błona cytoplazmatyczna i błona jądrowa zostały przerwane. Zmniejszyć szybkość i czas homogenizacji. <br /><br />3. Białka jądrowe obecne we frakcji błonowejPowtórzyć etap ekstrakcji białek jądrowych 1-2 razy przed ekstrakcją białek błonowych. <br /><br />4. Białka błonowe obecne we frakcji cytoplazmatycznej i jądrowejWarunki homogenizacji tkanki były zbyt surowe i błona jądrowa została przerwana. <br /><br />5. Degradacja białek <br /><br />a. Upewnić się, że PI został dodany do buforów C, N, M i CS przed użyciem. <br /><br />b. 50X PI nie był alikwotowany podczas przechowywania i tracił aktywność przy zbyt wielokrotnym zamrażaniu-rozmrażaniu. <br /><br />c. Homogenizować tkankę przez krótszy czas (<20 s), pozostawić probówkę na lodzie na kilka sekund przed kolejną homogenizacją.
Wykrywanie zróżnicowanych modyfikacji potranslacyjnych lub zróżnicowanej lokalizacji subkomórkowej białek docelowych
- Wzbogacanie białek o niskiej liczebności w celu wizualizacji i późniejszej analizy
- Przygotowanie ekstraktu jądrowego z tkanek ssaków i hodowanych komórek ma kluczowe znaczenie dla badania białek wiążących DNA, takich jak czynniki transkrypcyjne, przy użyciu technik przesunięcia ruchliwości żelu.
- Preparaty frakcji cytoplazmatycznych są przydatne do badania rozpuszczalnych białek obficie występujących w cytozolu.
- Preparaty frakcji błonowych do badania białek błonowych, takich jak receptory
- Preparaty frakcji cytoszkieletu do badania białek cytoszkieletu.
PROTOKÓŁ:
W przypadku buforów C, N, M i CS przed użyciem dodać 50X PI do stężenia roboczego 1X.
1. Zważyć określoną ilość tkanki (w gramach masy), pokroić na małe kawałki, a następnie pobrać pipetą lodowato zimny bufor C w ilości 2,0 ml na gram tkanki lub na 20 milionów komórek. Homogenizować* tkankę lub komórki z umiarkowaną prędkością (np. prędkość 4) przez 20 sekund. Pozostawić na lodzie na kilka sekund, powtórzyć homogenizację jeszcze dwa razy.
2. Obracać mieszaninę w temperaturze 4°C przez 20 minut.
3. Wirować z prędkością od 18 000 do 20 000 x g w temperaturze 4°C przez 20 minut. Usunąć i zachować supernatant w innej probówce. Białka cytoplazmatyczne znajdują się w supernatancie.
4. Przemyć osad 4 ml lodowato zimnego buforu W na gram tkanki/20 milionów komórek, obracać w temperaturze 4°C przez 5 minut. Wirować z prędkością od 18 000 do 20 000 x g w temperaturze 4°C przez 20 minut. Odsączyć supernatant.
5. Dodać 1,0 ml lodowato zimnego buforu N na gram tkanki/20 milionów komórek do osadu z kroku 4, obracać w temperaturze 4°C przez 20 minut. Wirować z prędkością od 18 000 do 20 000 x g w temperaturze 4°C przez 20 minut. Usunąć i zachować supernatant w innej probówce. Białka jądrowe* znajdują się w supernatancie.
6. Dodać 1,0 ml zimnego buforu M na gram tkanki/20 milionów komórek do osadu, obracać w temperaturze 4°C przez 20 minut. Wirować z prędkością od 18 000 do 20 000 x g w temperaturze 4°C przez 20 minut. Usunąć i zachować supernatant w innej probówce. Białka błonowe znajdują się w supernatancie.
7. Dodać 0,5 ml zimnego buforu CS na gram tkanki/20 milionów komórek do osadu z kroku 6, obracać w temperaturze 4°C przez 20 minut. Wirować z prędkością 18 000 do 20 000 x g w temperaturze 4°C przez 20 minut; zachować supernatant.
8. Przemyć osad 1,5 ml lodowato zimnego buforu C na gram tkanki/20 milionów komórek, obracać w temperaturze 4°C przez 5 minut. Wirować przy 18 000 do 20 000 x g w temperaturze 4°C przez 20 minut, zachować supernatant.
9. Połączyć supernatanty z kroków 7 i 8
- Wzbogacanie białek o niskiej liczebności w celu wizualizacji i późniejszej analizy
- Przygotowanie ekstraktu jądrowego z tkanek ssaków i hodowanych komórek ma kluczowe znaczenie dla badania białek wiążących DNA, takich jak czynniki transkrypcyjne, przy użyciu technik przesunięcia ruchliwości żelu.
- Preparaty frakcji cytoplazmatycznych są przydatne do badania rozpuszczalnych białek obficie występujących w cytozolu.
- Preparaty frakcji błonowych do badania białek błonowych, takich jak receptory
- Preparaty frakcji cytoszkieletu do badania białek cytoszkieletu.
PROTOKÓŁ:
W przypadku buforów C, N, M i CS przed użyciem dodać 50X PI do stężenia roboczego 1X.
1. Zważyć określoną ilość tkanki (w gramach masy), pokroić na małe kawałki, a następnie pobrać pipetą lodowato zimny bufor C w ilości 2,0 ml na gram tkanki lub na 20 milionów komórek. Homogenizować* tkankę lub komórki z umiarkowaną prędkością (np. prędkość 4) przez 20 sekund. Pozostawić na lodzie na kilka sekund, powtórzyć homogenizację jeszcze dwa razy.
2. Obracać mieszaninę w temperaturze 4°C przez 20 minut.
3. Wirować z prędkością od 18 000 do 20 000 x g w temperaturze 4°C przez 20 minut. Usunąć i zachować supernatant w innej probówce. Białka cytoplazmatyczne znajdują się w supernatancie.
4. Przemyć osad 4 ml lodowato zimnego buforu W na gram tkanki/20 milionów komórek, obracać w temperaturze 4°C przez 5 minut. Wirować z prędkością od 18 000 do 20 000 x g w temperaturze 4°C przez 20 minut. Odsączyć supernatant.
5. Dodać 1,0 ml lodowato zimnego buforu N na gram tkanki/20 milionów komórek do osadu z kroku 4, obracać w temperaturze 4°C przez 20 minut. Wirować z prędkością od 18 000 do 20 000 x g w temperaturze 4°C przez 20 minut. Usunąć i zachować supernatant w innej probówce. Białka jądrowe* znajdują się w supernatancie.
6. Dodać 1,0 ml zimnego buforu M na gram tkanki/20 milionów komórek do osadu, obracać w temperaturze 4°C przez 20 minut. Wirować z prędkością od 18 000 do 20 000 x g w temperaturze 4°C przez 20 minut. Usunąć i zachować supernatant w innej probówce. Białka błonowe znajdują się w supernatancie.
7. Dodać 0,5 ml zimnego buforu CS na gram tkanki/20 milionów komórek do osadu z kroku 6, obracać w temperaturze 4°C przez 20 minut. Wirować z prędkością 18 000 do 20 000 x g w temperaturze 4°C przez 20 minut; zachować supernatant.
8. Przemyć osad 1,5 ml lodowato zimnego buforu C na gram tkanki/20 milionów komórek, obracać w temperaturze 4°C przez 5 minut. Wirować przy 18 000 do 20 000 x g w temperaturze 4°C przez 20 minut, zachować supernatant.
9. Połączyć supernatanty z kroków 7 i 8
Disclaimer
O ile nie określono inaczej w naszym katalogu lub innej dokumentacji firmy dołączonej do produktu(-ów), nasze produkty są przeznaczone wyłącznie do użytku badawczego i nie mogą być wykorzystywane do żadnych innych celów, w tym między innymi do nieautoryzowanych zastosowań komercyjnych, zastosowań diagnostycznych in vitro, zastosowań terapeutycznych ex vivo lub in vivo lub jakiegokolwiek rodzaju konsumpcji lub zastosowania u ludzi lub zwierząt.
General description
Jednym z wyzwań proteomiki funkcjonalnej jest separacja złożonych mieszanin białek do ilościowej i różnicowej analizy lokalizacji subkomórkowej. Wymaga to znormalizowanych i powtarzalnych procedur operacyjnych w celu izolacji proteomów subkomórkowych z tkanek i komórek. Zestaw Chemicon Compartmental Protein Extraction Kit odpowiada na to wyzwanie, zapewniając innowacyjną, łatwą do wykonania i opłacalną metodę sekwencyjnej izolacji białek cytoplazmatycznych, jądrowych, błonowych i cytoszkieletowych z tkanek i komórek ssaków w oparciu o zastrzeżoną technikę.
Zestaw ten zawiera odczynniki wystarczające do wzbogacenia czterech białek przedziałowych z 5 gramów tkanek lub około 125 milionów komórek. Skuteczność frakcjonowania subkomórkowego została zbadana za pomocą SDS-PAGE i immunoblottingu wybranych białek markerowych.
Zestaw ten zawiera odczynniki wystarczające do wzbogacenia czterech białek przedziałowych z 5 gramów tkanek lub około 125 milionów komórek. Skuteczność frakcjonowania subkomórkowego została zbadana za pomocą SDS-PAGE i immunoblottingu wybranych białek markerowych.
Other Notes
Buffer C [HEPES (pH7.9), MgCl2, KCl, EDTA, Sucrose, Glycerol, Sodium OrthoVanadate] 1 x 18 mL (2-8°C) Buffer W [HEPES (pH7.9), MgCl2, KCl, EDTA, Sucrose, Glycerol, Sodium OrthoVanadate] 2 x 25 mL (2-8°C) Buffer N [HEPES (pH7.9), MgCl2, NaCl, EDTA, Glycerol, Sodium OrthoVanadate] 6 mL (2-8°C) Buffer M [HEPES (pH7.9), MgCl2, KCl, EDTA, Sucrose, Glycerol, Sodium deoxycholate, NP-40, Sodium OrthoVanadate] 6 mL (2-8°C) Buffer CS [Pipes (pH6.8), MgCl2, NaCl, EDTA, Sucrose, SDS, Sodium OrthoVanadate] 3 mL (2-8°C) 50 x PI [ A cocktail of protease inhibitors] 0.66 mL (-20°C)
Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.
signalword
Danger
hcodes
Hazard Classifications
Aquatic Chronic 3 - Eye Dam. 1 - Met. Corr. 1 - Skin Irrit. 2
Klasa składowania
8A - Combustible corrosive hazardous materials
wgk
WGK 3
Certyfikaty analizy (CoA)
Poszukaj Certyfikaty analizy (CoA), wpisując numer partii/serii produktów. Numery serii i partii można znaleźć na etykiecie produktu po słowach „seria” lub „partia”.
Masz już ten produkt?
Dokumenty związane z niedawno zakupionymi produktami zostały zamieszczone w Bibliotece dokumentów.
Powiązane treści
The Newsletter for Cell Biology Researchers
Nasz zespół naukowców ma doświadczenie we wszystkich obszarach badań, w tym w naukach przyrodniczych, materiałoznawstwie, syntezie chemicznej, chromatografii, analityce i wielu innych dziedzinach.
Skontaktuj się z zespołem ds. pomocy technicznej