17-10156
Biosensor lentiwirusowy LentiBrite α-aktynina-GFP
Zaloguj się, aby wyświetlić ceny organizacyjne i kontraktowe.
Wybierz wielkość
Zmień widok
Informacje o tej pozycji
UNSPSC Code:
12352207
NACRES:
NA.32
eCl@ss:
34360190
Technique(s):
cell based assay: suitable, immunocytochemistry: suitable, immunofluorescence: suitable, transfection: suitable
Pomoc techniczna
Potrzebujesz pomocy? Nasz zespół doświadczonych naukowców chętnie Ci pomoże.
Pozwól nam pomócQuality Segment
manufacturer/tradename
Chemicon®, LentiBrite
technique(s)
cell based assay: suitable, immunocytochemistry: suitable, immunofluorescence: suitable, transfection: suitable
UniProt accession no.
detection method
fluorometric
shipped in
dry ice
storage temp.
-65 to -96°C
Gene Information
human ... ACTN1(87)
General description
Przeczytaj naszą notę aplikacyjną w Nature Methods!
http://www.nature.com/app_notes/nmeth/2012/121007/pdf/an8620.pdf
(Kliknij tutaj!</A>)
Dowiedz się więcej o zaletach naszych LentiBrite Lentiviral Biosensors! Kliknij tutaj
Biosensory mogą być używane do wykrywania obecności/braku określonego białka, jak również subkomórkowej lokalizacji tego białka w żywej komórce. Znaczniki fluorescencyjne są często pożądane jako środek do wizualizacji interesującego białka w komórce za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej lub poklatkowego przechwytywania wideo. Wizualizacja żywych komórek bez zakłóceń pozwala badaczom obserwować warunki komórkowe w czasie rzeczywistym.
Systemy wektorów lentiwirusowych są popularnym narzędziem badawczym wykorzystywanym do wprowadzania produktów genowych do komórek. Transfekcja lentiwirusowa ma przewagę nad metodami niewirusowymi, takimi jak transfekcja chemiczna, w tym wyższą wydajność transfekcji komórek dzielących się i nie dzielących się, długotrwałą stabilną ekspresję transgenu i niską immunogenność.
EMD Millipore wprowadza LentiBrite Lentiviral Biosensors, nowy zestaw wstępnie zapakowanych cząstek lentiwirusowych kodujących ważne i podstawowe białka autofagii, apoptozy i struktury komórkowej do wizualizacji w różnych stanach komórkowych/chorobowych w analizie żywych komórek i in vitro.
Cząsteczki LentiBrite α-aktynina-GFP firmy EMD Millipore zapewniają jasną fluorescencję i precyzyjną lokalizację, umożliwiając analizę dynamiki adhezji ogniskowej w trudnych do transfekcji typach komórek.
http://www.nature.com/app_notes/nmeth/2012/121007/pdf/an8620.pdf
(Kliknij tutaj!</A>)
Dowiedz się więcej o zaletach naszych LentiBrite Lentiviral Biosensors! Kliknij tutaj
Biosensory mogą być używane do wykrywania obecności/braku określonego białka, jak również subkomórkowej lokalizacji tego białka w żywej komórce. Znaczniki fluorescencyjne są często pożądane jako środek do wizualizacji interesującego białka w komórce za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej lub poklatkowego przechwytywania wideo. Wizualizacja żywych komórek bez zakłóceń pozwala badaczom obserwować warunki komórkowe w czasie rzeczywistym.
Systemy wektorów lentiwirusowych są popularnym narzędziem badawczym wykorzystywanym do wprowadzania produktów genowych do komórek. Transfekcja lentiwirusowa ma przewagę nad metodami niewirusowymi, takimi jak transfekcja chemiczna, w tym wyższą wydajność transfekcji komórek dzielących się i nie dzielących się, długotrwałą stabilną ekspresję transgenu i niską immunogenność.
EMD Millipore wprowadza LentiBrite Lentiviral Biosensors, nowy zestaw wstępnie zapakowanych cząstek lentiwirusowych kodujących ważne i podstawowe białka autofagii, apoptozy i struktury komórkowej do wizualizacji w różnych stanach komórkowych/chorobowych w analizie żywych komórek i in vitro.
- Wstępnie zapakowane, znakowane fluorescencyjnie za pomocą GFP i RFP
- Wyższa skuteczność transfekcji w porównaniu z tradycyjnymi metodami chemicznymi i innymi metodami transfekcji niewirusowej
- Zdolność do transfekcji dzielących się, nie dzielących się i trudnych do transfekcji typów komórek, takich jak komórki pierwotne lub macierzyste
- Brak zakłóceń funkcji komórkowych
Cząsteczki LentiBrite α-aktynina-GFP firmy EMD Millipore zapewniają jasną fluorescencję i precyzyjną lokalizację, umożliwiając analizę dynamiki adhezji ogniskowej w trudnych do transfekcji typach komórek.
Migracja komórek wymaga zaangażowania miejsc kontaktu macierzy zewnątrzkomórkowej (ogniskowych przyczepności) z cytoszkieletem aktynowym. Siła skurczowa jest dalej generowana, gdy mikrofilamenty aktyny przekształcają się we włókna naprężeniowe, łącząc się w sposób antyrównoległy i rekrutując miozynę II. Kluczowym składnikiem włókien naprężeniowych jest białko związane ze spektryną, α-aktynina, która bezpośrednio łączy mikrofilamenty aktyny, a także łączy je z ogniskowymi adhezjami. Obrazowanie żywych komórek zawierających α-aktyninę połączoną z białkami fluorescencyjnymi zapewniło kluczowy wgląd w dynamiczne mechanizmy montażu włókien naprężeniowych i adaptacji do naprężeń.
Cząsteczki LentiBrite α-aktynina-GFP firmy EMD Millipore zapewniają jasną fluorescencję i precyzyjną lokalizację, umożliwiając analizę dynamiki adhezji ogniskowej w trudnych do transfekcji typach komórek.
Cząsteczki LentiBrite α-aktynina-GFP firmy EMD Millipore zapewniają jasną fluorescencję i precyzyjną lokalizację, umożliwiając analizę dynamiki adhezji ogniskowej w trudnych do transfekcji typach komórek.
Application
Obrazowanie za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej:
(Patrz rysunek 1 w arkuszu danych)
Komórki REF52 umieszczono na szkiełku komorowym i transdukowano cząsteczkami lentiwirusowymi w MOI 20 przez 24 godziny. Po wymianie pożywki i 48 godzinach dalszej inkubacji, komórki utrwalono formaldehydem i zamontowano. Obrazy uzyskano za pomocą zanurzeniowej mikroskopii fluorescencyjnej szerokiego pola. α-aktynina-GFP pojawia się w okresowym rozkładzie wzdłuż struktur mikrofilamentowych.
Dodatkowe typy komórek:
(Patrz rysunek 2 w arkuszu danych)
Komórki U2OS i HT1080 traktowano jak na rysunku 1 (patrz arkusz danych) przy MOI wynoszącym odpowiednio 40 i 10 przez 24 godziny.
Trudne do transfekcji typy komórek:
(patrz rysunek 3 w arkuszu danych)
Pierwotne typy komórek HUVEC i ludzkie mezenchymalne komórki macierzyste (HuMSC) umieszczono na szkiełkach komorowych i transdukowano cząsteczkami lentiwirusowymi przy MOI odpowiednio 40 i 10 przez 24 godziny.
Aby uzyskać optymalną wizualizację fluorescencji, zaleca się analizę docelowego poziomu ekspresji w ciągu 24-48 godzin po transfekcji/infekcji w celu optymalnej analizy żywych komórek, ponieważ intensywność fluorescencji może z czasem słabnąć, szczególnie w trudnych do transfekcji liniach komórkowych. Zainfekowane komórki można zamrozić po udanej transfekcji/infekcji i rozmrozić w hodowli, aby zachować dodatnią ekspresję fluorescencyjną przez ponad 24-48 godzin. Długość i intensywność ekspresji fluorescencyjnej różni się w zależności od linii komórkowej. W przypadku trudnych do transfekcji linii komórkowych może być wymagane wyższe MOI.
(Patrz rysunek 1 w arkuszu danych)
Komórki REF52 umieszczono na szkiełku komorowym i transdukowano cząsteczkami lentiwirusowymi w MOI 20 przez 24 godziny. Po wymianie pożywki i 48 godzinach dalszej inkubacji, komórki utrwalono formaldehydem i zamontowano. Obrazy uzyskano za pomocą zanurzeniowej mikroskopii fluorescencyjnej szerokiego pola. α-aktynina-GFP pojawia się w okresowym rozkładzie wzdłuż struktur mikrofilamentowych.
Dodatkowe typy komórek:
(Patrz rysunek 2 w arkuszu danych)
Komórki U2OS i HT1080 traktowano jak na rysunku 1 (patrz arkusz danych) przy MOI wynoszącym odpowiednio 40 i 10 przez 24 godziny.
Trudne do transfekcji typy komórek:
(patrz rysunek 3 w arkuszu danych)
Pierwotne typy komórek HUVEC i ludzkie mezenchymalne komórki macierzyste (HuMSC) umieszczono na szkiełkach komorowych i transdukowano cząsteczkami lentiwirusowymi przy MOI odpowiednio 40 i 10 przez 24 godziny.
Aby uzyskać optymalną wizualizację fluorescencji, zaleca się analizę docelowego poziomu ekspresji w ciągu 24-48 godzin po transfekcji/infekcji w celu optymalnej analizy żywych komórek, ponieważ intensywność fluorescencji może z czasem słabnąć, szczególnie w trudnych do transfekcji liniach komórkowych. Zainfekowane komórki można zamrozić po udanej transfekcji/infekcji i rozmrozić w hodowli, aby zachować dodatnią ekspresję fluorescencyjną przez ponad 24-48 godzin. Długość i intensywność ekspresji fluorescencyjnej różni się w zależności od linii komórkowej. W przypadku trudnych do transfekcji linii komórkowych może być wymagane wyższe MOI.
Research Category
Cell Structure
Cell Structure
Research Sub Category
Adhesion (CAMs)
Adhesion (CAMs)
Physical form
PEG precipitation
Preparation Note
Przechowywanie i obsługa
Lentiwirus jest stabilny przez co najmniej 4 miesiące od daty otrzymania, gdy jest przechowywany w temperaturze -80°C. Po pierwszym rozmrożeniu natychmiast umieścić na lodzie i zamrozić w podwielokrotnościach roboczych w temperaturze -80°C. Zamrożone podwielokrotności mogą być przechowywane przez co najmniej 2 miesiące. Dalsze zamrażanie/rozmrażanie może spowodować zmniejszenie miana wirusa i wydajności transdukcji.
WAŻNA UWAGA DOTYCZĄCA BEZPIECZEŃSTWA
Wektory lentiwirusowe z defektem replikacji, takie jak wektor 3. generacji dostarczony w tym produkcie, nie powodują żadnych chorób u ludzi ani zwierząt. Jednakże, lentiwirusy mogą integrować się z genomem komórki gospodarza i tym samym stwarzać pewne ryzyko mutagenezy insercyjnej. Materiał należy do grupy ryzyka 2 i powinien być obsługiwany pod kontrolą BSL2. Szczegółowe omówienie bezpieczeństwa biologicznego wektorów lentiwirusowych znajduje się w Pauwels, K. et al. (2009). Najnowocześniejsze wektory lentiwirusowe do zastosowań badawczych: Ocena ryzyka i zalecenia dotyczące bezpieczeństwa biologicznego. Curr. Gene Ther. 9: 459-474.
Lentiwirus jest stabilny przez co najmniej 4 miesiące od daty otrzymania, gdy jest przechowywany w temperaturze -80°C. Po pierwszym rozmrożeniu natychmiast umieścić na lodzie i zamrozić w podwielokrotnościach roboczych w temperaturze -80°C. Zamrożone podwielokrotności mogą być przechowywane przez co najmniej 2 miesiące. Dalsze zamrażanie/rozmrażanie może spowodować zmniejszenie miana wirusa i wydajności transdukcji.
WAŻNA UWAGA DOTYCZĄCA BEZPIECZEŃSTWA
Wektory lentiwirusowe z defektem replikacji, takie jak wektor 3. generacji dostarczony w tym produkcie, nie powodują żadnych chorób u ludzi ani zwierząt. Jednakże, lentiwirusy mogą integrować się z genomem komórki gospodarza i tym samym stwarzać pewne ryzyko mutagenezy insercyjnej. Materiał należy do grupy ryzyka 2 i powinien być obsługiwany pod kontrolą BSL2. Szczegółowe omówienie bezpieczeństwa biologicznego wektorów lentiwirusowych znajduje się w Pauwels, K. et al. (2009). Najnowocześniejsze wektory lentiwirusowe do zastosowań badawczych: Ocena ryzyka i zalecenia dotyczące bezpieczeństwa biologicznego. Curr. Gene Ther. 9: 459-474.
Analysis Note
Evaluated by transduction of HT-1080 cells and fluorescent imaging performed for assessment of target localization and transduction efficiency.
Other Notes
α-actinin-TagGFP Lentivirus:
One vial containing 25 µL of lentiviral particles at a minimum of 3 x 10E8 infectious units (IFU) per mL.
For lot-specific titer information, please see “Viral Titer” in the product box above.
Promoter
EF-1 (Elongation Factor-1
Multiplicty of Infection (MOI)
MOI = Ratio of # of infectious lentiviral particles (IFU) to # of cells being infected.
Typical MOI values for high transduction efficiency and signal intensity are in the range of 20-40. For this target, some cell types may require lower MOIs (e.g., HT-1080, HeLa, human mesenchymal stem cells (HuMSC)), while others may require higher MOIs (e.g., human umbilical vein endothelial cells (HUVEC), U2OS).
NOTE: MOI should be titrated and optimized by the end user for each cell type and lentiviral target to achieve desired transduction efficiency and signal intensity.
One vial containing 25 µL of lentiviral particles at a minimum of 3 x 10E8 infectious units (IFU) per mL.
For lot-specific titer information, please see “Viral Titer” in the product box above.
Promoter
EF-1 (Elongation Factor-1
Multiplicty of Infection (MOI)
MOI = Ratio of # of infectious lentiviral particles (IFU) to # of cells being infected.
Typical MOI values for high transduction efficiency and signal intensity are in the range of 20-40. For this target, some cell types may require lower MOIs (e.g., HT-1080, HeLa, human mesenchymal stem cells (HuMSC)), while others may require higher MOIs (e.g., human umbilical vein endothelial cells (HUVEC), U2OS).
NOTE: MOI should be titrated and optimized by the end user for each cell type and lentiviral target to achieve desired transduction efficiency and signal intensity.
Legal Information
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.
Klasa składowania
10 - Combustible liquids
wgk
WGK 2
Certyfikaty analizy (CoA)
Poszukaj Certyfikaty analizy (CoA), wpisując numer partii/serii produktów. Numery serii i partii można znaleźć na etykiecie produktu po słowach „seria” lub „partia”.
Masz już ten produkt?
Dokumenty związane z niedawno zakupionymi produktami zostały zamieszczone w Bibliotece dokumentów.