03-178

RIPAb+ SMN - zwalidowane przeciwciało RIP i zestaw primerów

from mouse

• Synonim(y): Składnik gems 1, gemin 1, rdzeniowy zanik mięśni (choroba Werdniga-Hoffmanna, choroba Kugelberga-Welandera), przeżycie neuronu ruchowego 1, telomeryczne
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.52
• eCl@ss: 32160702

Właściwości

• biological source: mouse
• Quality Segment: 100
• clone: monoclonal
• species reactivity: human
• species reactivity (predicted by homology): Xenopus, mouse
• manufacturer/tradename: RIPAb+, Upstate^®
• technique(s): RIP: suitable, immunocytochemistry: suitable, immunoprecipitation (IP): suitable, western blot: suitable
• isotype: IgG1κ
• NCBI accession no.: NP_000335.1
• UniProt accession no.: Q16637
• shipped in: dry ice
• Gene Information: human ... SMA4(11039)

Opis

General description

Białko przetrwania neuronów ruchowych (SMN) jest niezbędne do biogenezy małych jądrowych RNA (snRNA) - rybonukleoprotein (snRNP), głównych składników mechanizmu splicingu pre-mRNA. Chociaż ulega ona wszechobecnej ekspresji, niedobór SMN powoduje chorobę zwyrodnieniową neuronów ruchowych - rdzeniowy zanik mięśni (SMA). Niedobór SMN ma nieoczekiwany, specyficzny dla typu komórki wpływ na repertuar snRNA i mRNA. Zmienia stechiometrię snRNA i powoduje rozległe defekty splicingu pre-mRNA w licznych transkryptach różnych genów, preferencyjnie tych zawierających dużą liczbę intronów, w tkankach myszy z niedoborem SMN. Kompleks SMN odgrywa rolę w metabolizmie RNA i regulacji splicingu.

Zaobserwowano ~35 kDa; jednak obliczona masa cząsteczkowa wynosi 31,849 kDa

Immunogen

Epitop: Nieznany

Znakowane histydyną rekombinowane białko odpowiadające ludzkiemu SMN.

Application

Immunoprecypitacja białka wiążącego RNA:
Reprezentatywne dane partii.
Lizat RIP przygotowany z komórek HeLa (~2 X 10E7 równoważników komórek na IP) poddano immunoprecypitacji przy użyciu 5 µg normalnej mysiej IgG lub 5 µg przeciwciała anty-SMN i zestawu do immunoprecypitacji białka wiążącego RNA Magna RIP^® (nr kat. 17-700).
Pomyślna immunoprecypitacja RNA związanego z SMN została zweryfikowana przez qPCR przy użyciu starterów specyficznych dla ludzkiego kolagenu alfa typu 1 mRNA (patrz rysunki).
Szczegółowe informacje dotyczące eksperymentu można znaleźć w protokole Magna RIP (nr kat. 17-700) lub EZ-Magna RIP (nr kat. 17-701).

Analiza Western Blot:
Reprezentatywne dane partii.
Lizat komórek HeLa rozdzielono za pomocą elektroforezy, przeniesiono na membrany PVDF i sondowano anty-SMN w rozcieńczeniu 0,5 µg/ml.
Białka uwidoczniono za pomocą koziej anty-mysiej IgG sprzężonej z HRP przy użyciu systemu detekcji chemiluminescencji.
Strzałka wskazuje SMN (~35 kDa) (patrz rysunki).

Analiza immunocytochemiczna:
Reprezentatywne dane partii.
Rozcieńczenie 1:500 z reprezentatywnej partii wykryło SMN w komórkach HeLa (patrz rysunki).

Kategoria badawcza
Epigenetyka i funkcje jądrowe

Podkategoria badawcza
Metabolizm RNA i białka wiążące

Zestaw RIPAb+ SMN -RIP Validated Antibody & Primer Set zawiera przeciwciało i specyficzne kontrolne startery PCR.

Packaging

10 testów w zestawie. Zalecane użycie: ~5 μg przeciwciała na RIP (w zależności od kontekstu biologicznego).

Physical form

Format: Oczyszczony

Oczyszczone białko G

Przeciwciało anty-SMN (mysie monoklonalne). Jedna fiolka zawierająca 50 µg oczyszczonego białka G monoklonalnej IgG1ĸ w buforze zawierającym 0,1 M Tris-glicyny, 150 mM NaCl, pH 7,4, 0,05% azydku sodu przed dodaniem 30% glicerolu. Przechowywać w temperaturze -20°C.

Normalna mysia IgG. Jedna fiolka zawierająca 125 µg oczyszczonej mysiej IgG w 125 µl buforu do przechowywania zawierającego 0,1% azydku sodu. Przechowywać w temperaturze -20°C.

Primery RIP, U1snRNA. Jedna fiolka zawierająca 75 μL po 5 μM każdego primera specyficznego dla cDNA U1 snRNP. Przechowywać w temperaturze -20°C.
FOR: GGG AGA TAC CAT GAT CAC GAA GGT
REV: CCA CAA ATT ATG CAG TCG AGT TTC CC

Preparation Note

Przechowywać przez 1 rok w temperaturze -20°C od daty otrzymania.
Zalecenia dotyczące postępowania: Po otrzymaniu, a przed zdjęciem nasadki, odwirować fiolkę i delikatnie wymieszać roztwór. Rozdzielić do probówek mikrowirówkowych i przechowywać w temperaturze -20°C. Unikać powtarzających się cykli zamrażania/rozmrażania, które mogą uszkodzić IgG i wpłynąć na działanie produktu. Uwaga: Zmienność temperatur w zamrażarce poniżej -20°C może powodować zamarzanie roztworów zawierających glicerol podczas przechowywania.

Analysis Note

Kontrola
Zawiera mysie przeciwciało IgG kontroli ujemnej i startery kontrolne specyficzne dla cDNA ludzkiego U1snRNP.

RNA Binding Protein Immunoprecipitation:
RIP Lysate prepared from HeLa cells (~2 X 10E7 cell equivalents per IP) were subjected to immunoprecipitation using either 5 µg of a normal mouse IgG or 5 µg of Anti-SMN antibody and the Magna RIP^® RNA-Binding Protein Immunoprecipitation Kit (Cat. # 17-700).
Successful immunoprecipitation of SMN-associated RNA was verified by qPCR using RIP Primers U1snRNA (Please see figures).
Please refer to the Magna RIP (Cat. # 17-700) or EZ-Magna RIP (Cat. # 17-701) protocol for experimental details.

Legal Information

MAGNA RIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

O ile nie określono inaczej w naszym katalogu lub innej dokumentacji firmy dołączonej do produktu(-ów), nasze produkty są przeznaczone wyłącznie do użytku badawczego i nie mogą być wykorzystywane do żadnych innych celów, w tym między innymi do nieautoryzowanych zastosowań komercyjnych, zastosowań diagnostycznych in vitro, zastosowań terapeutycznych ex vivo lub in vivo lub jakiegokolwiek rodzaju konsumpcji lub zastosowania u ludzi lub zwierząt.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Klasa składowania: 10 - Combustible liquids
• wgk: WGK 1