03-176

RIPAb+ FXR1 - zwalidowane przeciwciało RIP i zestaw primerów

from mouse

• Synonim(y): kruchy X opóźnienie umysłowe, autosomalny homolog 1, kruche X białko związane z opóźnieniem umysłowym 1
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.32
• eCl@ss: 32160702

Właściwości

• biological source: mouse
• Quality Segment: 100
• antibody form: purified immunoglobulin
• clone: monoclonal
• species reactivity: mouse, human
• manufacturer/tradename: RIPAb+, Upstate^®
• technique(s): RIP: suitable, immunocytochemistry: suitable, immunoprecipitation (IP): suitable, western blot: suitable
• isotype: IgG2aκ
• NCBI accession no.: NP_001013456.1
• UniProt accession no.: P51114
• shipped in: dry ice
• Gene Information: human ... FXR1(8087)

Opis

General description

68 kDa

Przeciwciała RIPAb+ są oceniane przy użyciu testu immunoprecypitacji białka wiążącego RNA (RIP). Każdy zestaw przeciwciał RIPAb+ zawiera ujemne przeciwciało kontrolne w celu zapewnienia swoistości reakcji RIP i jest weryfikowany pod kątem koimmunoprecypitacji RNA związanego specyficznie z immunoprecypitowanym białkiem wiążącym RNA będącym przedmiotem zainteresowania. W stosownych przypadkach zestaw RIPAb+ zawiera również startery kontrolne do ilościowego RT-PCR (startery RIP) w celu biologicznego potwierdzenia wyników IP poprzez udaną ko-precypitację określonych docelowych RNA, takich jak informacyjny RNA. Protokół qPCR i sekwencje starterów są dostarczane, umożliwiając badaczom walidację protokołów RIP podczas stosowania przeciwciała w ich kontekście eksperymentalnym. Jeśli nie dostarczono testu specyficznego dla celu, zestaw RIPAb+ jest walidowany przy użyciu zautomatyzowanego testu opartego na mikroprzepływach poprzez wzbogacenie wykrywalnego RNA w stosunku do kontrolnej immunoprecypitacji.
Fragile X mental retardation-related protein 1 (FXR1) i FXR2 są członkami rodziny FMR1 o bardzo wysokim stopniu podobieństwa białek. FXR1 jest białkiem wiążącym RNA i ulega ekspresji w sercu, nerkach, mózgu i jądrach. Mutacje w FMR1 powodują najczęstszą formę upośledzenia umysłowego.

Immunogen

Rekombinowane białko odpowiadające ludzkiemu FXR1.

Application

Immunoprecypitacja z lizatu RIP:
Reprezentatywne dane partii.
Lizat RIP z komórek HeLa (~2 X 10E7 równoważników komórek na IP) poddano immunoprecypitacji przy użyciu 5 µg normalnej mysiej IgG (nr kat. CS200621) lub 5 µg przeciwciała anty-FXR1 (nr kat. CS204403). Dziesięć procent wytrąconych białek (pas 1: T7, pas 2: mysie IgG, pas 4: FXR1) i lizat całych komórek HeLa (pas 3) rozdzielono metodą elektroforezy, przeniesiono na nitrocelulozę i wysondowano przeciwciałem anty-FXR1 (nr kat. CS204403, 1:1000).
Białka wizualizowano przy użyciu zestawu One-Step IP-Western (GenScript nr kat. L00232).
Strzałka wskazuje Aly/REF (~68 kDa) (Rysunek 2).
Analiza Western Blot:
Reprezentatywne dane partii.
Lizat komórek HeLa rozdzielono za pomocą elektroforezy, przeniesiono na membrany PVDF i sondowano rozcieńczeniem anty-FXR1 (0,5 μg/ml).
Białka uwidoczniono za pomocą koziej anty-mysiej IgG sprzężonej z HRP przy użyciu systemu detekcji chemiluminescencji.
Strzałka wskazuje FXR1 (~68 kDa) (Rysunek 3).
Analiza immunocytochemiczna:
Reprezentatywne dane partii. Rozcieńczenie 1:500 z reprezentatywnej partii wykryło FXR1 w lizatach komórek HeLa i NIH/3T3. Jądro jest wybarwione DAPI (niebieski). To przeciwciało pozytywnie wybarwia cytoplazmę (rysunek 4).
Analiza immunoprecypitacji:
Reprezentatywna partia została użyta w niezależnym laboratorium do immunoprecypitacji. (Siomi, M., et al. (1996). Molecular and Cellular Biology. 3825-3832).

Kategoria badawcza
Epigenetyka i funkcje jądrowe

Podkategoria badawcza
Metabolizm RNA i białka wiążące

Sygnalizacja rozwojowa

Zestaw RIPAb+ FXR1 -RIP Validated Antibody & Primer Set zawiera przeciwciało i specyficzne kontrolne startery PCR.

Biochem/physiol Actions

To przeciwciało rozpoznaje FXR1.

Packaging

10 testów w zestawie. Zalecane użycie: ~5 μg przeciwciała na RIP (w zależności od kontekstu biologicznego).

Physical form

Format: Oczyszczony

Oczyszczone białko G

Przeciwciało anty-FXR1 (mysie monoklonalne), część nr CS204403. Jedna fiolka zawierająca 50 µg oczyszczonego białka G przeciwciała monoklonalnego w buforze zawierającym 0,1 M Tris-glicyny, 0,105 M NaCl, pH 7,4, 0,05% azydku sodu, przed dodaniem 30% glicerolu. Przechowywać w temperaturze -20°C.
Normalna mysia IgG, część nr CS200621. Jedna fiolka zawierająca 125 µg oczyszczonych mysich IgG w 125 µl buforu do przechowywania zawierającego 0,1% azydku sodu. Przechowywać w temperaturze -20°C.
Primery RIP, JUN, część nr CS203198. Jedna fiolka zawierająca 75 μL 5 μM każdego primera specyficznego dla cDNA ludzkiego JUN.
Przechowywać w temperaturze -20°C.
FOR: TCG ACA TGG AGT CCC AGG A
REV: GGC GAT TCT CTC CAG CTT CC

Preparation Note

Przechowywać przez 1 rok w temperaturze -20°C od daty otrzymania.
Zalecenia dotyczące postępowania: Po otrzymaniu, a przed zdjęciem nasadki, odwirować fiolkę i delikatnie wymieszać roztwór. Rozdzielić do probówek mikrowirówkowych i przechowywać w temperaturze -20°C. Unikać powtarzających się cykli zamrażania/rozmrażania, które mogą uszkodzić IgG i wpłynąć na działanie produktu. Uwaga: Zmienność temperatur w zamrażarce poniżej -20°C może spowodować zamrożenie roztworów zawierających glicerol podczas przechowywania.

Analysis Note

Kontrola
Zawiera mysie przeciwciało IgG kontroli ujemnej i startery kontrolne specyficzne dla cDNA ludzkiego JUN.

RNA Binding Protein Immunoprecipitation:
RIP Lysate prepared from Jurkat cells (~5 X 10E7 cell equivalents per IP) were subjected to immunoprecipitation using either 5 µg of a normal mouse IgG (Cat. # CS200621), or 5 µg of Anti-FXR1 antibody (Cat. # CS204403) and the Magna RIP^® RNA-Binding Protein Immunoprecipitation Kit (Cat. # 17-700).
Successful immunoprecipitation of Aly/REF-associated RNA was verified by qPCR using RIP Primers JUN, (Cat. # CS203198) (Figure 1).
Please refer to the Magna RIP (Cat. # 17-700) or EZ-Magna RIP (Cat. # 17-701) protocol for experimental details.

Other Notes

Stężenie: Stężenie specyficzne dla danej partii można znaleźć w certyfikacie analizy.

Legal Information

MAGNA RIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

O ile nie określono inaczej w naszym katalogu lub innej dokumentacji firmy dołączonej do produktu(-ów), nasze produkty są przeznaczone wyłącznie do użytku badawczego i nie mogą być wykorzystywane do żadnych innych celów, w tym między innymi do nieautoryzowanych zastosowań komercyjnych, zastosowań diagnostycznych in vitro, zastosowań terapeutycznych ex vivo lub in vivo lub jakiegokolwiek rodzaju konsumpcji lub zastosowania u ludzi lub zwierząt.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Klasa składowania: 10 - Combustible liquids
• wgk: WGK 1