Description générale
La poly-L-lysine (PLL) est un polymère de synthèse polyvalent dérivé de la lysine. Elle sert de polymère hydrosoluble à charge positive en biologie et en biomédecine. Une application importante de la PLL concerne la culture cellulaire, où elle est déposée sur les flacons et les boîtes afin de renforcer l'adhésion cellulaire, en particulier pour les cellules aux piètres capacités de fixation. Il s'agit d'un aspect crucial pour les cellules primaires et certains types de cellules cancéreuses. La charge positive de la PLL forme une couche qui attire les molécules chargées négativement à la surface des cellules, ce qui facilite l'adhésion tout en limitant grandement la toxicité pour les cellules par rapport aux surfaces de culture classiques.La PLL est aussi utilisée en microscopie et dans la recherche en neurosciences. Les substrats enduits permettent aux cellules, tissus et neurones d'adhérer aux lames et aux récipients de culture, facilitant ainsi les observations détaillées et les études prolongées. La PLL permet de s'affranchir des fixateurs qui endommagent les cellules et de cultiver des cellules et des tissus sur une longue période. Outre ces applications, la PLL est employée en immunocytochimie pour faire adhérer les tissus aux lames en vue de leur coloration, dans l'administration des médicaments pour encapsuler et administrer les composés thérapeutiques, et en thérapie génique pour acheminer le matériel génétique jusqu'aux cellules cibles. Dans l'ensemble, la PLL est considérée comme biocompatible, ce qui en fait un composé sans danger pour diverses applications biomédicales et un outil précieux pour la recherche biochimique et biomédicale.
Application
Les polymères poly-L-lysine peuvent servir à faciliter l'adhésion des cellules aux substrats solides, la conjugaison au méthotrexate pour favoriser le transport des médicaments, la microencapsulation des îlots de Langerhans, la microencapsulation de cellules, l'enduction de lames de verre et les préparations chromosomiques. La poly-L-lysine de faible poids moléculaire (30 000 Da à 70 000 Da) forme des solutions moins visqueuses, mais les versions de poids moléculaire plus élevé offrent davantage de points d'attache par molécule.
Actions biochimiques/physiologiques
La poly-L-lysine est un facteur d'attachement cellulaire non spécifique qui favorise l'adhésion des cellules aux substrats solides en augmentant les interactions électrostatiques entre les ions chargés négativement de la membrane cellulaire et de la surface de culture. Lorsqu'elle est adsorbée sur la surface de culture, la poly-L-lysine augmente le nombre de sites chargés positivement disponibles pour l'adhésion des cellules. En présence de cellules capables de la dégrader, la poly-L-lysine doit être utilisée comme facteur d'attachement cellulaire.
Caractéristiques et avantages
- Produit pouvant être utilisé dans la recherche en culture cellulaire et en biochimie.
- Composé de grande qualité convenant à de multiples applications de recherche.
Composants
La poly-L-lysine est un polymère d′acide aminé à charge positive, comportant environ un HBr par résidu de lysine. Le bromhydrate permet de former une poudre cristalline de poly-L-lysine soluble dans l′eau. Une petite quantité de produit peut se trouver dans des structures bêta, car le HBr interfère avec la formation de liaisons d′hydrogène entre les groupes aminés et les groupes carboxyliques ou les parties contenant des atomes N ou O.
Attention
Les solutions stériles sont stables pendant environ 2 ans si conservées entre 2 et 8 °C. Conserver à une température de -20 C en présence d′un déshydratant.
Notes préparatoires
Ce produit a un poids moléculaire de 150 000 Da à 300 000 Da. Pour éliminer le HBr, dissoudre le produit dans un tampon neutre et réaliser une dialyse pour retirer les sels. Aucun des produits poly-L-lysine n'a été exposé à l'acide trifluoroacétique et tous ont été dialysés pour éliminer les monomères, dimères ou trimères, l'élimination étant confirmée par chromatographie sur couche mince. De façon générale, pour utiliser ce produit comme facteur d'attachement, ajouter 50 ml d'eau stérile de qualité culture tissulaire à 5 mg de polylysine et revêtir la surface de façon aseptique à raison de 1 ml de solution pour 25 cm2. Laisser agir pendant 5 minutes, puis aspirer la solution et rincer soigneusement la surface. Laisser sécher pendant deux heures avant d'introduire les cellules et le milieu.
Remarque sur l'analyse
Le poids moléculaire est basé sur la viscosité et évalué par diffusion de lumière multi-angle (MALLS).