RNAINH-RO

Protector RNase-Inhibitor

• Synonym(e): Protector, Rnase-Inhibitor
• UNSPSC-Code: 41181611
• NACRES: NA.21

Eigenschaften

• Assay: >95% (SDS-PAGE)
• Qualitätsniveau: 100
• Mol-Gew.: ~50 kDa
• Verpackung: pkg of 10,000 U (03335402001 [5 x 2,000 U]); pkg of 2,000 U (03335399001)
• Hersteller/Markenname: Roche
• Parameter: 25-55 °C optimum reaction temp.
• pH-Bereich: 5.0-9.0
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Inhalt
Protector RNase-Inhibitor (40 U/μl) in Speicherpuffer: 20 mM HEPES-KOH, 50 mM KCl, 8 mM Dithiothreitol, 50 % Glycerin (v/v), pH-Wert ca. 7,6 (+4 °C).

Protector RNase-Inhibitor inaktiviert ein breites Spektrum an RNasen, einschließlich

• RNase A
• RNase B
• RNase T2

Deshalb kann der Protector RNase-Inhibitor in allen Anwendungen, in denen RNasen Probleme verursachen können, zur Prävention des Abbaus von RNasen beitragen. Er bietet zum Beispiel:

• Schutz der mRNA in cDNA-Synthesereaktionen, RT-PCR (in konventionellen Thermocyclern und qPCR-Systemen), oder In-vitro-Transkriptions-/Translationsreaktionen
• Schutz der viralen RNA während der In-vitro-Virusreplikation
• Hemmung von RNasen während der Isolierung und Aufreinigung von RNA
• Einsatz in RNase-Schutzassays
• Unterstützung bei der Herstellung RNase-freier Antikörper

Hinweis: Protector RNase-Inhibitor beeinträchtigt nicht die Enzyme, die üblicherweise zur Herstellung oder Analyse von RNA verwendet werden.

Spezifität

Protector RNase-Inhibitor hemmt eindeutig nicht RNase T1 und RNase 1.
Protector RNase-Inhibitor (20 U/ 20 μl Reaktion) hemmt RNase A bis zu 1 ng, RNase B bis zu 160 pg und RNase T2 bis zu 0,03 U/μl Reaktionsvolumen.
RNase H wird von Protector RNase-Inhibitor nicht gehemmt.
Hitzeinaktivierung: > 65 °C

Anwendung

Protector RNase-Inhibitor kann verwendet werden:

• zum Schutz von mRNA in cDNA-Synthesereaktionen, RT-PCR (in konventionellen Thermocyclern und qPCR-Systemen), z.B. mit dem LightCycler^® System, In-vitro-Transkriptions-/Translationssystem, RNase-Schutzassay, In-vitro-RNA-Synthese
• zum Schutz der viralen RNA während der In-vitro-Virusreplikation
• zur Hemmung von RNasen während Isolierung und Aufreinigung von RNA
• als Unterstützung bei der Herstellung RNase-freier Antikörper
• zur Synthetisierung von RNA-Sonden für die In-situ-Hybridisierung

Er ist bei jeder Anwendung nützlich, bei der RNasen ein potenzielles Problem darstellen können.

Leistungsmerkmale und Vorteile

• Zuverlässiger thermostabiler RNase-Inhibitor: Protector RNase-Inhibitor bleibt stabil, auch wenn thermostabile Umkehrtranskriptasen wie Transcriptor-Umkehrtranskriptase eingesetzt werden.
• Vorteilhaftes breites Spektrum möglicher Reaktionsbedingungen: Der Protector RNase-Inhibitor ist bei pH-Werten von 5,0 bis 9,0 und Temperaturen zwischen +25 °C und +55 °C aktiv (bei +60 °C ist noch eine partielle Aktivität messbar).
• Eliminiert Interferenz bei verschiedenen RNA-Analyseanwendungen: Die Leistung bleibt sogar bei Zugabe der 16-fachen Standardkonzentration erhalten.
• Kontrollierte hochreine Zubereitung: Jede Charge wird einer Funktionsprüfung gemäß den derzeitigen Qualitätskontrollverfahren mit Methoden wie der quantitativen RT-PCR unterzogen, um sicherzustellen, dass keine Endonukleasen, Ribonukleasen oder Nicking-Aktivitäten vorhanden sind.

Qualität

Jede Charge Protector RNase-Inhibitor wird mit dem Titan One Tube RT-PCR-Kit und dem LightCycler DPD-Kit einem Funktionstest unterzogen. Protector RNase-Inhibitor wird zudem auf Verunreinigungsaktivitäten, wie nachfolgend beschrieben, getestet.
Testpuffer: 50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl₂, 0,1 mM EDTA, 7 mM β-Mercaptoethanol; pH 7,5 (+37°C).
Abwesenheit von Endonukleasen: 1 μg EcoR I/Hind III*-Fragmente aus λ-DNA wird mit Protector RNase-Inhibitor in 50 μl Testpuffer bei +37  C für 1 Stunde inkubiert. Die Menge des Hemmers, die keine Veränderung des Bandenmusters verursacht, wird unter „Endo“ angegeben.
Abwesenheit der Nicking-Aktivität: 1 μg Supercoiled-pBR322-DNA wird mit Protector RNase-Inhibitor in 50 μl Testpuffer bei +37 °C für 1 Stunde inkubiert. Die Menge des Hemmers, die keine Entspannung der Supercoiled-DNA verursacht, ist unter „Nick. Act.“ angegeben.
Abwesenheit von Ribonuklease (1): 5 μg MS2-RNA werden mit Protector RNase-Inhibitor für 1 Stunde bei +37 °C in einem Endvolumen von 50 μl inkubiert. Die Menge des Hemmers, die keine Zersetzung der MS2-RNA verursacht, ist unter „RNase 1“ angegeben".
Abwesenheit von Ribonuklease (2): 5 μg MS2-RNA werden mit Protector RNase-Inhibitor für 1 Stunde bei +37 °C, dann 10 Minuten bei +65 °C in einem Endvolumen von 50 μl inkubiert. Die Menge des Hemmers, die keine Zersetzung der MS2-RNA verursacht, ist unter „RNase 2“ angegeben".

Einheitendefinition

Eine Einheit Protector RNase-Inhibitor ist definiert als die Menge an Protein, die benötigt wird, um 50 % der Aktivität von 5 ng RNase A zu hemmen.

Assay: Die Aktivität wird nach Blackburn als Fähigkeit zur Hemmung der Hydrolyse von zyklischer Cytidin-2′ : 3′-Monophosphorsäure gemessen. Unter Assay-Bedingungen hemmen 200 U Protector RNase-Inhibitor 50 % der Aktivität von 1 μg RNase A.

Volumenaktivität: 40 U/μl

Angaben zur Herstellung

Arbeitskonzentration:

• 5 bis 10 U in One-Step RT-PCR
• 25 bis 50 U in Two-Step RT-PCR
• 20 U für In-vitro-Transkription

Höhere Konzentrationen Protector RNase-Inhibitor können in der RT-PCR verwendet werden, wenn der Verdacht besteht, dass eine RNase-Kontamination dazu führt, dass bestimmte Proben nur schwer zu amplifizieren sind. Der Hemmer beeinträchtigt die Reaktion nicht. (In einem Testsystem beeinträchtigte selbst eine 16-fach höhere Konzentration
des Hemmers nicht die RT-PCR).

Sonstige Hinweise

Produktspezifikationen:
Ausgangsstoff: Rattenlunge; Produkt wird rekombinant in E. coli hergestellt
Isoelektrischer Punkt: pH 4,5
Temperatur, bei der Protector RNase-Inhibitor aktiv ist: +25 °C bis +55 °C; partielle Aktivität ist bei +60 °C immer noch messbar
Inaktivierung: Unter gravierenden Denaturierungsbedingungen (Temperaturen über +65 °C) ist der Hemmer inaktiviert
Keimbelastung: <50 KBE/ml
DNA-Gehalt: <100 pg/mg

Nur für die Life Science-Forschung. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

Rechtliche Hinweise

HINWEIS AN DEN KÄUFER: LIZENZAUSSCHLUSS
Dieses Produkt ist für die Verwendung in der Polymerase-Kettenreaktion (PCR) optimiert, die durch Patente im Eigentum der F. Hoffmann-La Roche Ltd ("Roche") geschützt ist. Durch den Erwerb dieses Produkts wird dem Käufer weder ausdrücklich noch konkludent eine Lizenz nach diesen Patenten zur Verwendung des PCR-Verfahrens übertragen. Eine Lizenz zur Verwendung des PCR-Verfahrens für bestimmte Forschungs- und Entwicklungstätigkeiten geht mit dem Erwerb bestimmter Reagenzien von Roche, Applied Biosystems oder anderen lizenzierten Lieferanten einher, wenn diese in Verbindung mit einem autorisierten Thermocyler verwendet werden, oder sie ist bei Applied Biosystems erhältlich. Diagnostische Zwecke erfordern eine Lizenz von Roche. Weitere Informationen zum Erwerb von Lizenzen erhalten Sie durch Kontaktaufnahme mit dem Director of Licensing bei Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404, USA.

LightCycler is a registered trademark of Roche

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash