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Merck

CSA001

Sigma-Aldrich

Rho-assoziierte Kinase (ROCK)-Aktivitätsassay

This Rho-associated Protein Kinase (ROCK) Activity Assay Kit is an enzyme immunoassay for detection of the active ROCK & DMPK family kinases.

Anmeldenzur Ansicht organisationsspezifischer und vertraglich vereinbarter Preise


About This Item

UNSPSC-Code:
12161503
eCl@ss:
32161000
NACRES:
NA.32

Speziesreaktivität (Voraussage durch Homologie)

all

Hersteller/Markenname

Chemicon®

Methode(n)

activity assay: suitable

Nachweisverfahren

colorimetric

Versandbedingung

ambient

Allgemeine Beschreibung

Einführung:

Kleine GTPase-Proteine der Rho-Familie sind wesentliche Regulatoren von verschiedenen Aspekten des Zellverhaltens, z. B. Zellmotilität, Zellproliferation und Apoptose. Sie spielen bei vielen motilen Reaktionen, welche das Aktinzytoskelett und/oder Mikrotubulinetzwerk involvieren, eine zentrale Rolle, von der Neuritenverlängerung über die Phoagozytose bis hin zur Krebszelleninvasion. Außerdem tragen sie zu Veränderungen der Genexpression bei, die zur Zellzyklusprogression oder differenzierten Zellantworten beitragen. Rho wird durch extrazelluläre Signale wie Lysophosphatidsäure (LPA) aktiviert. Die Wirkungen von Rho werden durch nachgelagerte Rho-Effektoren vermittelt. Eine dieser Effektoren ist Rho-assoziierte Proteinkinase (ROCK). Es wurden zwei ROCK-Isoformen identifiziert. ROCK-I (auch ROKβ genannt) und ROCK-II (auch Rho-Kinase und ROKα genannt). ROCK vermittelt die Rho-Signalisierung und reorganisiert das Aktinzytoskelett durch die Phosphorylierung von mehreren Substraten, die zur Anordnung der Aktinfilamente und Kontraktilität beitragen.
ROCK inaktiviert Myosin-Phosphatase durch die spezifische Phosphorylierung der Myosin-Phosphatase-Zieluntereinheit 1 (MYPT1) am Threoninrest 696, was zu einer Steigerung der phosphorylierten Form der 20 kDa-Myosin-Leichtkette (MLC20) führt. Dieser Threoninrest kann auch durch Kinasen der Myotonen Dystrophie Proteinkinasenfamilie (DMPK) phosphoryliert werden.

Prüfprinzip:
Das Rho-assoziierte Proteinkinase(ROCK)-Aktivitätsassay-Kit von Millipor’e ist ein Enzymimmunassay zum Nachweis der aktiven Kinasen der ROCK- und DMPK-Familien. Platten werden mit rekombinantem MYPT1, das einen Thr696-Rest enthält, der durch die Zugabe von ROCK-I, ROCK-II oder DMPK phosphoryliert werden kann, vorbeschichtet. Der Nachweisantikörper, der nur MYPT1, das an Thr696 phosphoryliert ist, spezifisch nachweist, wird anschließend angewandt. Anschließend wird ein HRP-konjugierter sekundärer Nachweisantikörper hinzugefügt. Die Menge des phosphorylierten Substrats wird durch die Zugabe des chromogenen Substrats Tetra-Methylbenzidin (TMB), das von gebundenem HRP von einer farblosen Lösung zu einer blauen Lösung (oder nach der Zugabe von Stopplösung zu einer gelben Lösung) umgewandelt wird, gemessen. Das Absorptionssignal bei 450 nm reflektiert die relative Menge der ROCK-Aktivität in der Probe.

Das ROCK-Assay-Kit wurde zur Bestimmung des Vorhandenseins und der relativen Menge von aufgereinigter ROCK-Aktivität sowie zum Screening von Inhibitoren oder Aktivatoren von Kinasen der ROCK- oder DMPK-Familie konzipiert.

Anwendung

Das Rho-assoziierte Proteinkinase (ROCK)-Aktivitätsassay-Kit von Millipor’e ist ein Enzymimmunassay zum Nachweis der aktiven Kinasen ROCK- und DMPK-Familien. Platten werden mit rekombinantem MYPT1, das einen Thr696-Rest enthält, der durch die Zugabe von ROCK-I, ROCK-II oder DMPK phosphoryliert werden kann, vorbeschichtet. Der Nachweisantikörper, der nur MYPT1, das an Thr696 phosphoryliert ist, spezifisch nachweist, wird anschließend angewandt. Anschließend wird ein HRP-konjugierter sekundärer Nachweisantikörper hinzugefügt. Die Menge des phosphorylierten Substrats wird durch die Zugabe des chromogenen Substrats Tetra-Methylbenzidin (TMB), das von gebundenem HRP von einer farblosen Lösung zu einer blauen Lösung (oder nach der Zugabe von Stopplösung zu einer gelben Lösung) umgewandelt wird, gemessen. Das Absorptionssignal bei 450 nm reflektiert die relative Menge der ROCK-Aktivität in der Probe.

Das ROCK-Assay-Kit wurde zur Bestimmung des Vorhandenseins und der relativen Menge von aufgereinigter ROCK-Aktivität sowie zum Screening von Inhibitoren oder Aktivatoren von Kinasen der ROCK- oder DMPK-Familie konzipiert. Es kann auch zur Bewertung der Potenz von pharmakologischen Mitteln auf Kinasen der ROCK- oder DMPK-Familien verwendet werden.

Komponenten

MYPT1 vorbeschichtete 96-Well-Multistreifenplatte: Eine 96-Well-Multistreifenplatte, vorbeschichtet mit MYPT1

Anti-Phospho-MYPT1(Thr696)-Antikörper: Ein Fläschchen mit 10 µg Anti-Phospho-MYPT1(Thr696)-Antikörper

TMB/E-Substrat: Eine Flasche mit 12 ml

Stopplösung: Eine Flasche mit 12 ml

TBS, 20X: Eine Flasche mit 50 ml 20X TBS

20 % Tween® 20 (v/v): Eine Flasche mit 3 ml

Mikrotiterplattenabdeckungen: Zwei Plattenabdeckungen

Assay-Verdünnungspuffer I: Ein Fläschchen mit 1 ml

ATP(10 mM): Ein Fläschchen mit 50 µl

MgCl2 (1 M): Ein Fläschchen mit 100 µl

30 % BSA: Ein Fläschchen mit 1 ml

Anti-Kaninchen-IgG-HRP-Sekundärantikörper der Ziege: Ein Fläschchen mit 30 µl

ROCK-Inhibitor Y-27632: Ein Fläschchen mit 150 µl

Aktive Rho-assiziierte Kinase II (ROCK-II): Ein Fläschchen mit 10 µg

Lagerung und Haltbarkeit

Lagern Sie Kit-Materialien bei den auf dem Etikett und im Handbuch angegebenen Temperaturen; verwenden Sie sie ab Empfangsdatum innerhalb von 4 Monaten.

Rechtliche Hinweise

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
TWEEN is a registered trademark of Croda International PLC

Piktogramme

CorrosionExclamation mark

Signalwort

Warning

H-Sätze

Gefahreneinstufungen

Met. Corr. 1 - Skin Sens. 1

Lagerklassenschlüssel

8A - Combustible corrosive hazardous materials


Analysenzertifikate (COA)

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Formaldehyde, a common indoor air pollutant, exacerbates asthma and synergizes with allergen to induce airway hyperresponsiveness (AHR) in animal models. The mechanisms mediating formaldehyde-induced AHR remain poorly understood. We posit that formaldehyde modulates agonist-induced contractile response of human airway smooth

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