HPLCによる分析、Ascentis® Express C18、リン脂質除去処理、HybridSPE®-Phospholipid使用
CONDITIONS
sample preparation
SPE (Solid Phase Extraction)
sample/matrix
rat plasma
SPE well plate
HybridSPE-Precipitation 96-well Plate, 50 mg/well (575656-U)
sample addition
100 μL rat plasma followed by 300 μL 1% formic acid in acetonitrile
elution
apply vacuum
column
Ascentis Express C18, 5 cm x 2.1 mm I.D., 2.7 μm particles (53822-U)
mobile phase
[A] 10 mM ammonium acetate; [B] 10 mM ammonium acetate in acetonitrile
gradient
0 min - 95% (A); 10 min - 50% (A); 18 min - 50% (A); 18.1 min - 95% (A); 22 min - 95% (A)
flow rate
0.5 mL/min
column temp.
35 °C
detector
ABI 3200QT; ESI (+), MRM (184/103 m/z)
injection
5 μL
詳細
アプリケーション
HybridSPE-沈殿:
沈殿 最初に100 μLのラット血漿をHybridSPE-PPTプレートに加えたあと、300 μLの1%ギ酸入りアセトニトリルを加えてタンパク質を沈殿させます。真空には適用しないでください。
撹拌 HybridSPE-PPTプレートをボルテックスで短時間撹拌してください。
真空適用 96ウェル真空多岐管を用いて真空を適用し、溶出液を解析用に回収してください。
標準タンパク質の沈殿:
混合 100 μLのラット血漿と300 μLの1%ギ酸入りアセトニトリルを混合してください。
撹拌 ボルテックスと遠心分離機で撹拌してください。
単離上清を解析用に回収してください。
法的情報
Ascentis is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
HybridSPE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany