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  • Identification of fragments from Autographa californica polyhedrin protein essential for self-aggregation and exogenous protein incorporation.

Identification of fragments from Autographa californica polyhedrin protein essential for self-aggregation and exogenous protein incorporation.

BMC biochemistry (2015-02-05)
Alicia Sampieri, Agustín Luz-Madrigal, Jesus Zepeda, Luis Vaca
要旨

Baculoviruses are widely used for the production of recombinant proteins, biopesticides and as gene delivery systems. One of the viral forms called polyhedra has been recently exploited as a scaffold system to incorporate or encapsulate foreign proteins or peptide fragments. However, an efficient strategy for foreign protein incorporation has not been thoroughly studied. Based on the crystal structure of polyhedrin, we conducted an in silico analysis of the baculovirus Autographa californica nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) polyhedrin protein to select the minimum fragments of polyhedrin that could be incorporated into polyhedra. Using confocal and transmission electron microscopy we analyzed the expression and cellular localization of the different polyhedrin fragments fused to the green fluorescent protein (EGFP) used as reporter. The amino fragment 1-110 contains two repeats formed each of two β sheets followed by a α helix (amino acids 1-58 and 58-110) that are important for the formation and stability of polyhedra. These fragments 1-58, 58-110 and 1-110 could be incorporated into polyhedra. However, only fragments 1-110 and 58-110 can self-aggregate. These results demonstrate that 58-110 is the minimum fragment that contributes to the assembly of the recombinant polyhedra via self-aggregation. This is the minimum sequence that can be used to efficiently incorporate foreign proteins into polyhedra.

材料
製品番号
ブランド
製品内容

Sigma-Aldrich
DAPI, for nucleic acid staining
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量
Sigma-Aldrich
塩化ナトリウム, for molecular biology, DNase, RNase, and protease, none detected, ≥99% (titration)
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量
Sigma-Aldrich
塩化ナトリウム 溶液, 0.9% in water, BioXtra, suitable for cell culture
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量
Sigma-Aldrich
塩化ナトリウム, BioReagent, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture, suitable for plant cell culture, ≥99%
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量
Sigma-Aldrich
塩化ナトリウム 溶液, 5 M in H2O, BioReagent, for molecular biology, suitable for cell culture
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量
Sigma-Aldrich
四酸化オスミウム, ReagentPlus®, 99.8%
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量
Sigma-Aldrich
四酸化オスミウム 溶液, 4 wt. % in H2O
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量
Sigma-Aldrich
塩化ナトリウム, JIS special grade, ≥99.5%
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量
Sigma-Aldrich
塩化ナトリウム 溶液, BioUltra, for molecular biology, ~5 M in H2O
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量
Sigma-Aldrich
塩化ナトリウム, 99.999% trace metals basis
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量
Sigma-Aldrich
塩化ナトリウム, BioUltra, for molecular biology, ≥99.5% (AT)
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量
Sigma-Aldrich
四酸化オスミウム 溶液, suitable for electron microscopy, 4% in H2O
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量
Sigma-Aldrich
四酸化オスミウム 溶液, 2.5 wt. % in tert-butanol
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量
Sigma-Aldrich
塩化ナトリウム, SAJ first grade, ≥99.0%
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量
Sigma-Aldrich
四酸化オスミウム, ACS reagent, ≥98.0%
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量
Sigma-Aldrich
四酸化オスミウム 溶液, suitable for electron microscopy, 2% in H2O
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量
Sigma-Aldrich
塩化ナトリウム, BioXtra, ≥99.5% (AT)
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量
Sigma-Aldrich
グルタルアルデヒド 溶液, Grade I, 25% in H2O, specially purified for use as an electron microscopy fixative
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量
Sigma-Aldrich
グルタルアルデヒド 溶液, 50 wt. % in H2O
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量
Sigma-Aldrich
グルタルアルデヒド 溶液, Grade II, 25% in H2O
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量
Sigma-Aldrich
塩化ナトリウム, BioPerformance Certified, ≥99% (titration), suitable for insect cell culture, suitable for plant cell culture
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量
Sigma-Aldrich
塩化ナトリウム, AnhydroBeads, −10 mesh, 99.999% trace metals basis
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量
Sigma-Aldrich
Os EnCat® 40, extent of labeling: 0.3 mmol/g Os loading
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量
Sigma-Aldrich
塩化ナトリウム-35Cl, 99 atom % 35Cl
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量
Sigma-Aldrich
塩化ナトリウム, meets analytical specification of Ph. Eur., BP, USP, 99.0-100.5%
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量
Sigma-Aldrich
塩化ナトリウム 溶液, 1 M
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量
Sigma-Aldrich
塩化ナトリウム 溶液, 5 M
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量
Sigma-Aldrich
塩化ナトリウム, random crystals, optical grade, 99.9% trace metals basis
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量
Sigma-Aldrich
四酸化オスミウム, Sealed ampule.
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量
Sigma-Aldrich
グルタルアルデヒド 溶液, Grade I, 70% in H2O, specially purified for use as an electron microscopy fixative or other sophisticated use
カタログ番号
容量
在庫状況
単価
数量