XBAI-RO

Xba I

from recombinant E.Coli

• UNSPSC Code: 12352204
• NACRES: NA.54
• Biological source: Escherichia coli

特性

• biological source: Escherichia coli
• form: solution
• packaging: pkg of 1,000 U (10674257001 [10 U/μl]), pkg of 20,000 U (10674273001 [10 U/μl]), pkg of 20,000 U (11047663001 [40 U/μl]), pkg of 5,000 U (10674265001 [10 U/μl])
• manufacturer/tradename: Roche
• parameter: 37 °C optimum reaction temp.
• technique(s): DNA sequencing: suitable
• storage temp.: −20°C

詳細

General description

Xba Iは、T↓*CTAGA配列を認識し、5'-付着末端を持った断片を生成します。本酵素は、切断部位を切断する前に、ターゲット配列の周囲に少なくとも2つのヌクレオチドを必要とします。

適合する末端
Xba I末端は、Avr I、Nhe I、およびSpe Iによって生成された断片に適合します。

イソ制限酵素
本酵素がイソ制限酵素を持つことは知られていません。

メチル化の感度
DNAのXba I消化は、GATC配列中のアデニンの6N位置をメチル化するE.coliのdam遺伝子産物によって阻害されます。本酵素はまた、認識配列上に示された位置（*）における5-メチルシトシンまたは5-ヒドロキシメチルシトシンによっても阻害されます。

SuRE/Cutバッファー系での活性
太字で示したバッファーは、最適な活性のために推奨されるバッファーです：
A B L M H
100% 75-100% 75-100% 75-100% 100%

コンプリートPCRミックス中での相対活性
PCRミックス（Taq DNAポリメラーゼバッファー）中での相対活性は60%です。PCRミックスには、λDNA、プライマー、10 mM Tris-HCl（pH 8.3、+20°C）、50 mM KCl、1.5 mM MgCl2、200 μM dNTPs、2.5 U Taq DNAポリメラーゼが含まれています。混合物は、25回の増幅サイクルに供しました。Pwo SuperYield DNAポリメラーゼPCRミックスの反応バッファー中での活性は25%です。GC-RICH溶液を添加した場合、活性は100%に上昇します。

インキュベーション温度
+37°C


各DNAの切断部位数
λ Ad2 SV40 ?X174 M13mp7 M13mp18 pBR322 pBR328 pUC18
1 5 0 0 0 1 0 0 1

PFGE試験済み
Xba　Iは、パルスフィールドゲル電気泳動（細菌クロモソームでの）において試験済みです。PFGE解析用のアガロース内に埋め込んだゲノムDNA（E. coli C 600）の切断では、1 μgのDNAあたり10 Uの酵素を使用し、約4時間のインキュベーションを行うことを推奨します。

ライゲーションおよび再切断アッセイ
1 μgのpUC18 DNAの完全な消化により得られたXba I断片を、66 mM Tris-HCl、5 mM MgCl2、5 mMジチオスレイトール、1 mM ATP、pH 7.5（＋20℃）において、容量10 μLとして＋4℃で16時間インキュベートし、1 UのT4 DNAリガーゼと連結させると、pUC18 DNAの90%以上が回収されます。
続くXba Iを用いた再切断によって、pUC18 × Xba I断片の95%以上の典型的パターンが得られます。

Application

制限酵素Xba Iは、ゲノムDNAの消化に使用されています。[1]

Biochem/physiol Actions

スター活性
Xba Iの配列特異性は、低いイオン強度または、インキュベーション混合物へのグリセロール、エタノール、DMSOの添加によって緩みます。
認識部位：TCTAGA
TCTAGA
制限部位：T↓CTAGA
T↓CTAGA
熱失活：Xba Iは、65℃、15分間のインキュベーションによって熱失活できます（15 U/μg DNAまで）。より高濃度のXba Iでは、この条件下で完全に失活できません。

各DNAの切断部位数

• λ：1
• φX174：0
• Ad2：5
• M13mp7：0
• pBR322：0
• pBR328：0
• pUC18：1
• SV40：0

Analysis Note

SuRE/Cutバッファーシステム
太字で示したバッファーは、最適な活性のために推奨されます

• A：100%
• B：75-100%
• H：100%
• L：75-100%
• M：75-100%

非特異的なエンドヌクレアーゼ活性を含みません
1 μgのλDNAを、50 μLのSuRE/CutバッファーH中で、過剰のXba Iと16時間インキュベーションしました。酵素のユニット数は酵素特異的なパターンを変化させないことが分析証明書内に記載されています。

エキソヌクレアーゼ活性を含みません
約5 μgの[3H]標識ウシ胸腺DNAを、全量100 μLの50 mM Tris-HCl、10 mM MgCl2、1 mMジチオスレイトール、pH約7.5の溶液中で、3 μLのXba Iと37℃で4時間インキュベートしました。分析証明書内に記載されている通り、これらの条件下では、放射活性は検出されません。

PCRバッファー中での活性：60%

PCRミックス（Taq DNAポリメラーゼバッファー）中での相対活性は60%です。PCRミックスには、λDNA、プライマー、10 mM Tris-HCl（pH　8.3、20°C）、50 mM KCl、1.5 mM MgCl₂、200 μM dNTP、2.5 U Taq DNA ポリメラーゼが含まれています。混合物は、25回の増幅サイクルに供しました。Pwo SuperYield DNAポリメラーゼPCRミックスの反応バッファー中での活性は25%です。GC-RICH溶液を添加した場合、活性は100%に上昇します。Pwo SuperYield DNAポリメラーゼPCRミックスは、米国では利用できません。

Other Notes

1ユニットは、総量50 μL（1倍）のSuRE/CutバッファーHにおいて+37℃、1時間で1 μgのλdam^–DNAを完全に切断する酵素活性です。

ライフサイエンス研究のみに使用できます。診断用には使用できません。

キットの構成要素のみ

• Enzyme Solution
• SuRE/Cut Buffer H 10x concentrated

安全性情報

• 保管分類: 12 - Non Combustible Liquids
• wgk: WGK 1
• flash_point_f: does not flash
• flash_point_c: does not flash