SPEI-RO

Spe I

from Sphaerotilus species

• 別名: Spe I, SPE I
• UNSPSC Code: 12352204
• NACRES: NA.54
• Specific activity: 10000 U/mL
• Biological source: bacterial (Sphaerotilus spp.)

特性

• biological source: bacterial (Sphaerotilus spp.)
• Quality Segment: 100
• form: solution
• specific activity: 10000 U/mL
• packaging: pkg of 1,000 U (11008951001 [10 U/μl]), pkg of 1,000 U (11207644001 [40 U/μl]), pkg of 200 U (11008943001 [10 U/μl])
• manufacturer/tradename: Roche
• parameter: 37 °C optimum reaction temp.
• color: colorless
• pH: 8.0 (39 °F)
• solubility: water: miscible
• suitability: suitable for molecular biology
• application(s): life science and biopharma; sample preparation
• foreign activity: Endonucleases 10 units, none detected
• shipped in: dry ice
• storage temp.: −20°C

詳細

General description

Spe Iは配列*A↓*CTAGTを認識して、5′-付着末端を有する断片を生成します。

Biochem/physiol Actions

認識部位：*A*CTAGT
*A*CTAGT
制限酵素切断部位：*A↓*CTAGT
*A↓*CTAGT
熱失活：Spe Iは、65°Cで15分間のインキュベーションで熱失活します（100 U/μg DNA以下）。

各種 DNA における切断部位数

• λ：0
• φX174: 0
• Ad2: 3
• M13mp7: 0
• pBR322: 0
• pBR328: 0
• pUC18: 0
• SV40: 0

Preparation Note

−25°C以下で保存しないこと

Analysis Note

SuRE/Cutバッファーシステム
最適の活性を得るためには太字で記したバッファーが推奨されます。

• A：75～100%
• B：75～100%
• H：100%
• L：75～100%
• M：100%

適合する末端
Spe I末端は、Bln I、Nhe I、およびXba Iにより生成された末端と互換性があります。

イソ制限酵素
本酵素は、Bcu IおよびAhl Iのイソ制限酵素です。

メチル化の感度
上記の認識配列の（*）が示すように、Spe IはN6-メチルアデニンおよび5′-メチルシトシン（^mA↓^m CTAGT）が存在すると阻害されます。

インキュベーション温度
+37°C

PFGE試験済み
Spe Iはパルスフィールドゲル電気泳動法で試験されています（細菌染色体上）。PFGE分析のためにアガロースに埋め込まれたゲノムDNA（E.coli C 600）の切断には、10 Uの酵素/μg DNAを使用して4時間インキュベーションすることを推奨します。

ライゲーションと再切断アッセイ
1 μg Ad2のDNAの完全消化により得られたSpe I断片を、10 μLの量で1U T4 DNAリガーゼを使って66 mM Tris-HCl、5 mM MgCl₂、5 mMジチオスレイトール、1 mM ATP（pH 7.5、+20°C）中で+4°Cで16時間ライゲーションすると、Ad2 DNAの回収率は>90%となります。
これに続いて、Spe Iを用いて再度切断すると、収率>95%でAd2 x Spe I断片の典型パターンが得られます。

非特異的エンドヌクレアーゼ活性なし。
1 μg のAd2 DNAを 50 μl のSuRE/CutバッファーHに入れ、過剰量のSpe Iの存在下で16時間インキュベートします。酵素に固有なパターンを変化させない酵素ユニット数が分析証明書に明記されています。

エキソヌクレアーゼ活性なし
約5 μg [3H]標識仔ウシ胸腺DNAを、全量100 μLの50 mM Tris-HCl、10 mM MgCl₂、1 mMジチオエリトリトール（pH約7.5）中で3 μLのSpe Iとともに+37°Cで4時間インキュベートします。試験成績書で述べられているように、これらの条件下で放射能の放出は検出されません。

PCRバッファー中の活性：試験せず

Other Notes

1単位は、全量25 μlのSuRE/CutバッファーH中で+37°Cにおいて1時間で1 μgのAd2 DNAを完全に切断する酵素活性です。

生命科学研究用途に限ります。診断措置において使用しないでください。

キットの構成要素のみ

• Enzyme Solution
• SuRE/Cut Buffer H 10x concentrated

安全性情報

• 保管分類: 12 - Non Combustible Liquids
• wgk: WGK 1
• flash_point_f: does not flash
• flash_point_c: does not flash