The optimal protein concentration needed for the assay is sample dependent and should be empirically determined via titration/dilution of the protein sample. For use of Suc-LLVY-AMC substrate on heart samples, one may consider homogenizing using 10 volumes of HEPES buffer (50 mmol/L) containing 20 mmol/L KCl, 5 mmol/L MgCl2, 1 mmol/L DTT, pH 7.5, followed up with centrifugation at 10,000×g for 30 min. at 4 °C. Under this condition, 30 ug protein per assay seems to work well as described by the following publication that may be of interest for reference:
APT280
20Sプロテアソーム活性アッセイ
別名:
20S プロテアソームアッセイ, プロテアソームアッセイ, プロテアソーム活性アッセイキット, プロテアソーム活性キット
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| サイズ/SKU | 在庫状況 | 単価 |
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この商品について
UNSPSC Code:
12161503
NACRES:
NA.84
eCl@ss:
32161000
Species reactivity:
mammals
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product line
Chemicon®
Quality Segment
species reactivity
mammals
technique(s)
activity assay: suitable
General description
はじめに：
ユビキチン-プロテアソーム経路は、真核細胞の細胞質における主要なタンパク質分解系であり、短寿命の調節タンパク質の選択的分解と異常な立体構造を持つタンパク質の急速な除去を触媒します（Hershko & Ciechanover 1998; Hochstrasser 1996）。この経路における重要なプロテアーゼは、ATP依存性のタンパク質分解複合体である26Sプロテアソームであり、樽状の20Sプロテアソーム（700 kDa）と、2つの19S（700 kDa）調節複合体が会合することで形成されます（Baumeister et al. 1998; Coux et al. 1996）。プロテアソーム複合体の触媒コアである20Sプロテアソームは、アポトーシス、DNA修復、エンドサイトーシス、細胞周期制御に関与する重要なタンパク質の分解を担っています（Coux et al. 1996; Hoffman & Rechsteiner 1996; Hochstrasser 1995）。CHEMICON®プロテアソーム活性アッセイキットは、細胞ライセート中のプロテアソーム活性の評価または阻害剤スクリーニングのための、迅速で効率の良い高感度なシステムとなります。
原理：
Chemiconのプロテアソーム活性アッセイキットは、基質LLVYを認識するプロテアソーム活性をアッセイするための単純で好都合な手段を提供します（Meng et al. 1999）。 このアッセイは、標識基質LLVY-AMCから切断されたフルオロフォア、7-アミノ-4-メチルクマリン（AMC）の検出に基づいています。 吸収波長=351 nm。 発光波長=430 nm。 遊離AMCの蛍光は、蛍光光度計にセットされた380/460 nmフィルターを使用して定量できます。
プロテアソーム阻害剤であるラクタシスチンが、スクリーニング目的の試験阻害剤として含まれています。 ラクタシスチンは微生物由来の天然物であり、現時点で知られているプロテアソームの最も特異的かつ強力な阻害薬です（Fenteany & Schreiber 1998）。
用途：
プロテアソーム活性アッセイキットは、細胞内プロテアソーム活性を比較的迅速に検出する方法です。 このアッセイを使用して、精製プロテアソーム酵素の試験、in vitro阻害剤スクリーニング、およびプロテアソーム調節の研究を行うことができます。
CHEMICONプロテアソーム活性アッセイキットは、研究用途のみを意図しており、診断用途や治療用途には使用できません。
ユビキチン-プロテアソーム経路は、真核細胞の細胞質における主要なタンパク質分解系であり、短寿命の調節タンパク質の選択的分解と異常な立体構造を持つタンパク質の急速な除去を触媒します（Hershko & Ciechanover 1998; Hochstrasser 1996）。この経路における重要なプロテアーゼは、ATP依存性のタンパク質分解複合体である26Sプロテアソームであり、樽状の20Sプロテアソーム（700 kDa）と、2つの19S（700 kDa）調節複合体が会合することで形成されます（Baumeister et al. 1998; Coux et al. 1996）。プロテアソーム複合体の触媒コアである20Sプロテアソームは、アポトーシス、DNA修復、エンドサイトーシス、細胞周期制御に関与する重要なタンパク質の分解を担っています（Coux et al. 1996; Hoffman & Rechsteiner 1996; Hochstrasser 1995）。CHEMICON®プロテアソーム活性アッセイキットは、細胞ライセート中のプロテアソーム活性の評価または阻害剤スクリーニングのための、迅速で効率の良い高感度なシステムとなります。
原理：
Chemiconのプロテアソーム活性アッセイキットは、基質LLVYを認識するプロテアソーム活性をアッセイするための単純で好都合な手段を提供します（Meng et al. 1999）。 このアッセイは、標識基質LLVY-AMCから切断されたフルオロフォア、7-アミノ-4-メチルクマリン（AMC）の検出に基づいています。 吸収波長=351 nm。 発光波長=430 nm。 遊離AMCの蛍光は、蛍光光度計にセットされた380/460 nmフィルターを使用して定量できます。
プロテアソーム阻害剤であるラクタシスチンが、スクリーニング目的の試験阻害剤として含まれています。 ラクタシスチンは微生物由来の天然物であり、現時点で知られているプロテアソームの最も特異的かつ強力な阻害薬です（Fenteany & Schreiber 1998）。
用途：
プロテアソーム活性アッセイキットは、細胞内プロテアソーム活性を比較的迅速に検出する方法です。 このアッセイを使用して、精製プロテアソーム酵素の試験、in vitro阻害剤スクリーニング、およびプロテアソーム調節の研究を行うことができます。
CHEMICONプロテアソーム活性アッセイキットは、研究用途のみを意図しており、診断用途や治療用途には使用できません。
Application
プロテアソーム活性アッセイキットは、基質LLVYを認識するプロテアソーム活性をアッセイするための単純で好都合な手段を提供します。
溶解バッファー：50 mM HEPES（pH 7.5）、5 mM EDTA、150 mM NaCl、1% Triton X-100。ライセートに2 mM ATPを添加すると、完全な26Sプロテアソームの回収率が改善します。
以下も参照してください：Hoffman, L. 1992 at http://www.jbc.org/cgi/reprint/267/31/22362.pdf
以下も参照してください：Hoffman, L. 1992 at http://www.jbc.org/cgi/reprint/267/31/22362.pdf
Other Notes
メルクのカタログまたは製品に添付されたメルクのその他の文書に記載されていない場合、メルクの製品は研究用途のみを目的としているため、他のいかなる目的にも使用することはできません。このような目的としては、未承認の商業用途、in vitroの診断用途、ex vivoあるいはin vivoの治療用途、またはヒトあるいは動物へのあらゆる種類の消費あるいは適用などがありますが、これらに限定されません。
Legal Information
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
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当該品目 | |||
|---|---|---|---|
| description - | description - | description sufficient for 100 fluorometric tests | description The uPA Activity Assay Kit provides a quick, efficient & sensitive system for evaluation of uPA activity & for screening of uPA inhibitors. |
| species reactivity mammals | species reactivity mammals | species reactivity - | species reactivity human |
| Quality Level 100 | Quality Level 100 | Quality Level - | Quality Level 100 |
| technique(s) activity assay: suitable | technique(s) activity assay: suitable, flow cytometry: suitable | technique(s) - | technique(s) activity assay: suitable |
| product line Chemicon® | product line Chemicon® | product line - | product line - |
保管分類
10 - Combustible liquids
適用法令
試験研究用途を考慮した関連法令を主に挙げております。化学物質以外については、一部の情報のみ提供しています。 製品を安全かつ合法的に使用することは、使用者の義務です。最新情報により修正される場合があります。WEBの反映には時間を要することがあるため、適宜SDSをご参照ください。
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ishl_indicated
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jan
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Could you please provide clarification on the protocol for the 20S Proteasome activity assay (APT280)? The protocol does not specify the protein concentration or the buffer for diluting the sample. Additionally, I need guidance on homogenizing and diluting heart samples for the assay. What buffer should I use for homogenization and dilution?
1 回答-
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