D4527
Desossiribonucleasi I
Type II, lyophilized powder, Protein ≥80 %, ≥2,000 units/mg protein
Sinonimo/i:
DNasi I, Desossi-ribonucleato 5′-oligonucleotido-idrolasi
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About This Item
Prodotti consigliati
Origine biologica
bovine pancreas
Tipo
Type II
Forma fisica
lyophilized powder
Attività specifica
≥2,000 units/mg protein
PM
~31 kDa
Purificato mediante
chromatography
Composizione
Protein, ≥80%
tecniche
DNA extraction: suitable
Solubilità
0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, clear
Compatibilità
suitable for molecular biology
applicazioni
diagnostic assay manufacturing
diagnostic assay manufacturing
Attività estranea
Chymotrypsin ≤0.01%
Protease ≤0.005%
RNase ≤0.01%
Condizioni di spedizione
wet ice
Temperatura di conservazione
−20°C
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Applicazioni
DNasi I è usata per incidere il DNA come primo passaggio per incorporare basi marcate nel DNA. L′enzima di Sigma è stato usato nello stock di nucleasi insieme alla RNasi durante la preparazione del lisato cellulare di linee cellulari di rene canino Madin-Darby (MDCK) II È stato usato inoltre durante l′estrazione dell′RNA dal virus Sindbis.
La desossiribonucleasi I da pancreas bovino è stata usata per l′identificazione, la localizzazione e l′espressione di due nuovi geni umani simili alla desossiribonucleasi I. La desossiribonucleasi I da pancreas bovino è stata usata anche in uno studio per esaminare un nuovo approccio per l′ottenimento di RNasi, DNasi, colesterolesterasi e tripsina a elevata attività dal pancreas di bovini.
Usato per rimuovere DNA da campioni di proteine.
Azioni biochim/fisiol
DNasi I è un′endonucleasi che agisce sui legami fosfodiesterici adiacenti a pirimidine per produrre polinucleotidi con fosfati 5′ terminali. In presenza di Mg2+, la DNasi I scinde ciascun filamento di DNA indipendentemente e i siti di clivaggio sono casuali. Entrambi i filamenti di DNA sono scissi approssimativamente nello stesso sito in presenza di Mn2+. Si è trovato che il pH ottimale è fra 7 e 8. Cationi bivalenti come Mn2+, Ca2+, Co2+, e Zn2+ sono attivatori dell′enzima. Una concentrazione di Ca2+ 5 mM stabilizza l′enzima contro la digestione proteolitica. La DNasi I da pancreas bovino è costituito da quattro componenti, A, B, C, e D distinguibili per via cromatografica con rapporti molari rispettivamente 4:1:1. D è presente solo in piccole quantità. 2-Mercaptoetanolo, chelanti, sodio dodecil solfato (SDS) e actina sono noti inibitori dell′attività enzimatica.
Caratteristiche e vantaggi
Efficace nella formazione di interruzioni (nick) lungo il DNA e nella rimozione del DNA da campioni di proteine
Definizione di unità
Un′unità Kunitz produrrà una variazione in A260 pari a 0,001 per minuto per mL a pH 5,0 a 25 °C, usando DNA tipo I o III come substrato.
Stato fisico
Contiene cloruro di calcio
Nota sulla preparazione
L′enzima in polvere può essere ricostituito in acqua o in qualunque tampone a pH compreso tra 4,0 e 9,0, fatta eccezione per il tampone fosfato. Evitare i chelanti del calcio. La soluzione di DNasi I 10 mg/mL in NaCl 0,15 M può perdere il <10% della sua attività se conservata per una settimana frazionata a −20 °C. Le stesse soluzioni conservate frazionate a 2-8 °C possono perdere circa il 20% dell′attività. Rimane attiva fino a cinque ore a 60 °C a pH fra 5 e 7 e perde attività in <10 minuti a 68 °C. L′attività decade del 6%/ora in tampone acetato (a pH 5,0) e tris (a pH 7,2) alla concentrazione di 1 mg/mL.
Risultati analitici
Proteina determinata da biureto.
Inibitore
N° Catalogo
Descrizione
Determinazione del prezzo
Avvertenze
Danger
Indicazioni di pericolo
Consigli di prudenza
Classi di pericolo
Resp. Sens. 1
Codice della classe di stoccaggio
11 - Combustible Solids
Classe di pericolosità dell'acqua (WGK)
WGK 3
Punto d’infiammabilità (°F)
Not applicable
Punto d’infiammabilità (°C)
Not applicable
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