D4527

Desossiribonucleasi I

Type II, lyophilized powder, Protein ≥80 %, ≥2,000 units/mg protein

• Sinonimo/i: DNasi I, Desossi-ribonucleato 5′-oligonucleotido-idrolasi
• Numero CAS: 9003-98-9
• UNSPSC Code: 12352204
• NACRES: NA.54
• EC Number: 232-667-0
• MDL number: MFCD00130918
• Numero CE: 3.1.21.1 (BRENDA, IUBMB)
• Specific activity: ≥2,000 units/mg protein
• Biological source: bovine pancreas

Proprietà

• biological source: bovine pancreas
• Quality Segment: 300
• type: Type II
• form: lyophilized powder
• specific activity: ≥2,000 units/mg protein
• mol wt: ~31 kDa
• purified by: chromatography
• composition: Protein, ≥80%
• technique(s): DNA extraction: suitable
• solubility: 0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, clear
• suitability: suitable for molecular biology
• application(s): diagnostic assay manufacturing
• foreign activity: Chymotrypsin ≤0.01%, Protease ≤0.005%, RNase ≤0.01%
• shipped in: wet ice
• storage temp.: −20°C

Descrizione

Application

DNasi I è usata per incidere il DNA come primo passaggio per incorporare basi marcate nel DNA. L′enzima di Sigma è stato usato nello stock di nucleasi insieme alla RNasi durante la preparazione del lisato cellulare di linee cellulari di rene canino Madin-Darby (MDCK) II[1] È stato usato inoltre durante l′estrazione dell′RNA dal virus Sindbis.[2]

La desossiribonucleasi I da pancreas bovino è stata usata per l′identificazione, la localizzazione e l′espressione di due nuovi geni umani simili alla desossiribonucleasi I. La desossiribonucleasi I da pancreas bovino è stata usata anche in uno studio per esaminare un nuovo approccio per l′ottenimento di RNasi, DNasi, colesterolesterasi e tripsina a elevata attività dal pancreas di bovini.

Usato per rimuovere DNA da campioni di proteine.

Biochem/physiol Actions

DNasi I è un′endonucleasi che agisce sui legami fosfodiesterici adiacenti a pirimidine per produrre polinucleotidi con fosfati 5′ terminali. In presenza di Mg²⁺, la DNasi I scinde ciascun filamento di DNA indipendentemente e i siti di clivaggio sono casuali. Entrambi i filamenti di DNA sono scissi approssimativamente nello stesso sito in presenza di Mn²⁺. Si è trovato che il pH ottimale è fra 7 e 8. Cationi bivalenti come Mn²⁺, Ca²⁺, Co²⁺, e Zn²⁺ sono attivatori dell′enzima. Una concentrazione di Ca²⁺ 5 mM stabilizza l′enzima contro la digestione proteolitica. La DNasi I da pancreas bovino è costituito da quattro componenti, A, B, C, e D distinguibili per via cromatografica con rapporti molari rispettivamente 4:1:1. D è presente solo in piccole quantità.[3] 2-Mercaptoetanolo, chelanti, sodio dodecil solfato (SDS)[4] e actina[5] sono noti inibitori dell′attività enzimatica.

Features and Benefits

Efficace nella formazione di interruzioni (nick) lungo il DNA e nella rimozione del DNA da campioni di proteine

Physical form

Contiene cloruro di calcio

Preparation Note

L′enzima in polvere può essere ricostituito in acqua o in qualunque tampone a pH compreso tra 4,0 e 9,0, fatta eccezione per il tampone fosfato. Evitare i chelanti del calcio. La soluzione di DNasi I 10 mg/mL in NaCl 0,15 M può perdere il <10% della sua attività se conservata per una settimana frazionata a −20 °C. Le stesse soluzioni conservate frazionate a 2-8 °C possono perdere circa il 20% dell′attività. Rimane attiva fino a cinque ore a 60 °C a pH fra 5 e 7 e perde attività in <10 minuti a 68 °C. L′attività decade del 6%/ora in tampone acetato (a pH 5,0) e tris (a pH 7,2) alla concentrazione di 1 mg/mL.

Analysis Note

Proteina determinata da biureto.

Other Notes

Un′unità Kunitz produrrà una variazione in A₂₆₀ pari a 0,001 per minuto per mL a pH 5,0 a 25 °C, usando DNA tipo I o III come substrato.

Informazioni sulla sicurezza

• pictograms: GHS08
• signalword: Danger
• hcodes: H334
• pcodes: P261 - P284 - P501
• Hazard Classifications: Resp. Sens. 1
• Classe di stoccaggio: 11 - Combustible Solids
• wgk: WGK 3
• flash_point_f: Not applicable
• flash_point_c: Not applicable