D4263

Desossiribonucleasi I

Standardized vial containing 2,000 Kunitz units of DNase I (D4527), vial of ≥0.25 mg total protein

• Sinonimo/i: DNasi I, Desossi-ribonucleato 5′-oligonucleotido-idrolasi
• Numero CAS: 9003-98-9
• UNSPSC Code: 12352204
• NACRES: NA.54
• EC Number: 232-667-0
• MDL number: MFCD00130918
• Numero CE: 3.1.21.1 (BRENDA, IUBMB)
• Specific activity: 1700—2300 U/vial
• Biological source: bovine pancreas

Proprietà

• biological source: bovine pancreas
• form: powder
• specific activity: 1700—2300 U/vial
• mol wt: ~31 kDa
• purified by: chromatography
• packaging: vial of ≥0.25 mg total protein
• technique(s): DNA extraction: suitable
• solubility: 0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, clear
• suitability: suitable for molecular biology
• application(s): diagnostic assay manufacturing
• storage temp.: −20°C

Descrizione

Application

La DNasi I è usata per incidere il DNA come primo passaggio per incorporarvi basi marcate. La DNasi I di Sigma è stata usata insieme ad altri enzimi per la raccolta e la dissociazione del tumore, durante l′isolamento e la caratterizzazione molecolare di cellule staminali tumorali in tumori della mammella murini MMTV-Wnt-1.[1]

La desossiribonucleasi I da pancreas bovino è stata usata in uno studio per stabilire che le desossiribonucleasi I di mammifero sono state classificate in tre tipi sulla base delle differenze nelle loro concentrazioni tissutali. La desossiribonucleasi I da pancreas bovino è stata usata anche in uno studio per confrontare le tre strutture primarie della desossiribonucleasi isolata da pancreas bovino, ovino e suino.

Usato per rimuovere DNA da campioni di proteine.

Biochem/physiol Actions

La DNasi I è un′endonucleasi che agisce sui legami fosfodiesterici adiacenti a pirimidine per produrre polinucleotidi con 5′ fosfati terminali. In presenza di Mg²⁺, la DNasi I scinde ciascun filamento di DNA indipendentemente e i siti di clivaggio sono casuali. Entrambi i filamenti di DNA sono scissi approssimativamente nello stesso sito in presenza di Mn²⁺. Si è trovato che il pH ottimale è fra 7 e 8. Cationi bivalenti come Mn²⁺, Ca²⁺, Co²⁺, e Zn²⁺ sono attivatori dell′enzima. Una concentrazione di Ca²⁺ 5 mM stabilizza l′enzima nei confronti della digestione proteolitica. La DNasi I da pancreas bovino è costituita da quattro componenti, A, B, C, e D, distinguibili per via cromatografica con rapporti molari rispettivamente 4:1:1. Si trovano solo piccole quantità di D.[2] 2-Mercaptoetanolo, chelanti, sodio dodecil solfato (SDS)[3] e actina[4] sono noti inibitori dell′attività enzimatica.

Features and Benefits

Rimozione efficiente del DNA: la desossiribonucleasi I ottenuta da pancreas bovino è una efficace endonucleasi che taglia entrambi i filamenti di DNA in modo casuale, rendendola una scelta adatta per la rimozione del DNA dai campioni di proteine.

Applicazioni versatili: questo enzima può servire a creare interruzioni (nick) lungo il DNA, incorporare basi marcate nel DNA e isolare e caratterizzare a livello molecolare le cellule staminali neoplastiche nei tumori mammari murini. È utile anche negli studi comparativi sulla desossiribonucleasi isolata da pancreas bovino, ovino e porcino.

Stabile: questo enzima rimane attivo fino a un massimo di 5 ore a 60 °C, a pH compreso tra 5 e 7, e può essere conservato per un massimo di una settimana a −20 °C con minima perdita di attività. La sua stabilità lo rende un'opzione pratica ed economicamente vantaggiosa.

Preparation Note

L′enzima in polvere può essere ricostituito in acqua o in qualunque tampone a pH compreso tra 4,0 e 9,0, fatta eccezione per il tampone fosfato. Evitare i chelanti del calcio. La soluzione di DNasi I 10 mg/mL in NaCl 0,15 M può perdere <10% della sua attività se conservata per una settimana in aliquote a −20 °C. Le stesse soluzioni conservate in aliquote a 2-8 °C possono perdere circa il 20% dell′attività. Rimane attiva fino a cinque ore a 60 °C a pH fra 5 e 7 e perde attività in <10 minuti a 68 °C. L′attività decade del 6%/ora in tampone acetato (a pH 5,0) e tris (a pH 7,2) alla concentrazione di 1 mg/mL.

Analysis Note

Proteina determinata con il biureto.

Other Notes

Una unità Kunitz produrrà un ΔA₂₆₀ di 0,001 per minuto per mL a pH 5,0 a 25 °C, usando DNA tipo I o III come substrato.

Informazioni sulla sicurezza

• pictograms: GHS08
• signalword: Danger
• hcodes: H334
• pcodes: P261 - P284 - P501
• Hazard Classifications: Resp. Sens. 1
• Classe di stoccaggio: 11 - Combustible Solids
• wgk: WGK 3
• flash_point_f: Not applicable
• flash_point_c: Not applicable
• ppe: Eyeshields, Gloves, type N95 (US)