利用Amicon^® Ultra离心超滤管浓缩尿液

准确测定尿液蛋白对于疾病诊断和管理至关重要。问题是，尿液蛋白的浓度通常低于临床分析的检测限。这时可先用Amicon^® Ultra-4 mL 10 kDa MWCO超滤管浓缩尿液标本，满足分析的浓度要求。

方法

用Amicon^® Ultra-4 mL 10 kDa MWCO超滤管浓缩尿液标本中的免疫球蛋白轻链（本周蛋白）。

1. 测定24小时尿液标本中的总蛋白量。
2. 取4 mL尿液加入Amicon^® Ultra-4mL超滤管。
3. 3400 x g离心30–45分钟（最终获得约25-50 μL浓缩样本）。即浓度增至原始标本的160倍。
4. 将吸头插入超滤管底部，吸出浓缩样本。
5. 用浓缩液进行琼脂糖电泳，以定量轻链并鉴定其他蛋白。测定轻链占尿液所有组分的百分率，再将轻链百分率乘以24小时蛋白总浓度（克/24小时体积）。
6. 用浓缩液进行免疫固定电泳，以鉴定轻链。

用Centricon® (C)和Amicon® Ultra (A)离心浓缩装置浓缩尿液标本后，游离免疫球蛋白轻链（本周蛋白）的电泳图。每条泳道~25 kDa处的黑色条带即为该蛋白。

其他说明

1. 浓缩尿液经免疫固定电泳后，可能还会分离出异质的正常免疫球蛋白，各种微异质性轻链形成“阶梯效应”，本周蛋白可能就位于该阶梯中。需要再进行双向电泳分析才能确认本周蛋白的存在。
2. 假如抗原过量，需要稀释浓缩液至抗原（本周蛋白）和抗体平衡。

相关产品

1. Amicon^® Ultra超滤管还可用于浓缩血清、血浆和脑脊液，解决类似的分析浓度问题。用琼脂糖电泳法检测患者的游离轻链，其浓度需要达到约20 mg/mL。免疫固定电泳法又比琼脂糖电泳灵敏10倍。
2. 我们的静置浓缩器（Minicon^®装置）也可用于浓缩尿液中的本周蛋白。

致谢

本次Amicon^® Ultra超滤管尿液浓缩的实验研究由Mark Merchant博士(Helena Laboratories, Beaumont, TX)进行。

参考文献

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5. Christenson RH, Tucker JA, Allen E. 1985. Results of dipstick tests, visual inspection, microscopic examination of urine sediment, and microbiological cultures of urine compared for simplifying urinalysis.. 31(3):448-451. https://doi.org/10.1093/clinchem/31.3.448