Amicon^® Ultra超滤管纯化抗体标记反应物

使用Amicon^® Ultra标准式离心超滤管，无需稀释样品，只要经过几轮洗滤操作，就能有效去除抗体标记反应中的未结合标记物。可按下列步骤通过离心超滤管去除未反应的荧光标记。

去除抗体标记反应后的未结合荧光标记物

1. 分别将1 mg荧光标记抗体组成的2 mL溶液加入2支Amicon^® Ultra-4 mL 10 kDa MWCO超滤管，4000 x g下离心10分钟。
2. 加水将截留液（每支约50 μL）重新稀释至2 mL并再次离心。重复此步骤两次。
3. 每次离心后，保留截留液和滤过液样品，以供SDS-PAGE分析和紫外-可见光分光光度法定量。

结果

图 1. FITC标记BSA在洗滤前和每次洗滤后（共4次）的SDS-PAGE电泳图。起始材料和首次滤过液中可见游离FITC。1次超滤后去除大部分游离标记，后续超滤后基本不见游离FITC。图2的荧光检测数据可证实该结果。

图 2. 1次超滤后，游离FITC信号减少约80%，后续超滤后信号减少98%。说明超滤可取代凝胶过滤用于蛋白标记反应物的纯化。