缓冲液置换和浓缩实现少量抗体纯化：Amicon^® Pro系统

如要从少量(0.5-10 mL)样品中纯化抗体，推荐使用Amicon^® Pro纯化系统。这款装置采用离心技术，在纯化、缓冲液置换和浓缩时无需对样品进行转移或稀释，因此可尽量降低损失抗体的风险。下列方法通过配置protein A/G琼脂糖树脂的Amicon^® Pro系统，专门开发用于0.5 mL样品的抗体亲和纯化。

方法

1. 在置换管中加入200 µL Protein A/G树脂（50%浆液）和1.5 mL洗涤缓冲液。1000 x g离心1 min。
2. 加入0.5 mL样品，通过吹吸与树脂混匀。在轨道式摇床中垂直振荡1 h。【注意：旋转混合效率更低，因为不能有效收集壁上和盖上残留的树脂。】
3. 1000 x g离心1 min，清除未结合物质。
4. 加入1.5 mL洗涤缓冲液。1000 x g离心1 min。
5. 装配Amicon^® Ultra 0.5 mL超滤管(10k MWCO)。
6. 加入1 mL洗脱缓冲液，与树脂混匀。4000 x g离心10 min。
7. 加入1.5 mL最终缓冲液（自行选择）。4000 x g离心15 min以置换缓冲液和浓缩。
8. 取出Amicon^® Ultra超滤管，置于滤液收集管中。
9. 通过倒置离心回收Amicon^® Ultra 0.5 mL超滤管中的纯化抗体。

结果

兔血清（货号S20-100ML）的IgG通过配置蛋白A或蛋白G琼脂糖的Amicon^® Pro系统（10kDa MWCO，货号ACK5010PA和ACK5010PG）或传统的离心柱纯化。接着将纯化获得的IgG进行缓冲液置换和浓缩，该过程在同一Amicon^® Pro装置中进行，或从离心柱中转移至Amicon^® Ultra浓缩管中进行。

使用Amicon^® Pro系统的过程只需要6次移液/离心，而使用传统离心柱和浓缩管的过程需要11次移液/离心。如下图所示，抗体回收率不变。

使用Amicon^® Pro系统和传统离心柱的兔血清来源抗体纯化(n=3)