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P5147
Protéase from Streptomyces griseus
Type XIV, ≥3.5 units/mg solid, powder
Synonyme(s) :
Actinase E, Pronase E
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About This Item
Numéro CAS:
Numéro CE :
Numéro MDL:
Code UNSPSC :
12352204
eCl@ss :
32160410
Nomenclature NACRES :
NA.54
Produits recommandés
Source biologique
Streptomyces griseus
Niveau de qualité
Type
Type XIV
Forme
powder
Activité spécifique
≥3.5 units/mg solid
Solubilité
10 mM NaAc (pH 7.5) and 5 mM CaAc: soluble 0.2 mg/mL at 37 °C, clear, colorless to tan
Conditions d'expédition
wet ice
Température de stockage
−20°C
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Spécificité
Mélange d′au moins trois activités protéolytiques incluant une sérine protéase extracellulaire. En général, les sérines protéases sont actives sur une large gamme de substrats, et cette activité est attribuée à un site actif composé d′un résidu Asp, un résidu His et un résidu Ser dans la molécule. Cette enzyme hydrolyse préférentiellement les liaisons peptidiques du côté carboxylique de l′acide glutamique ou aspartique.
Application
Cette enzyme est plus active dans une plage de pH plus élevée que les protéases alcalines connues, présentant une activité protéolytique même dans une solution de NaOH à 0,2 N. Elle s′avère utile pour la protéolyse des protéines insolubles et pour les études structurelles sur les protéines.
La protéase de Streptomyces griseus a été utilisée :
- pour la digestion du tissu de noyau gélatineux[1]
- dans la catalyse de la réaction de Mannich à un récipient[2]
- pour la déprotéinisation de l′amidon[3]
- dans la digestion de tranches de cerveau pour la dissociation des cellules[4]
La protéase est généralement utilisée pour les procédures d′isolement des acides nucléiques, en réalisant des incubations de 0,5 à 3,0 heures en présence de dodécylsulfate de sodium à 0,2 % et d′EDTA à 10 mM.
La protéase est une enzyme utilisée pour décomposer les protéines par hydrolyse des liaisons peptidiques. Elle est utilisée pour dégrader les protéines, pour étudier les inhibiteurs de protéases et pour évaluer la cinétique d′inactivation thermique. La protéase est utilisée lors des incubations dans les procédures d′isolement des acides nucléiques. La protéase de Streptomyces griseus a été utilisée dans des études de cristallographie et de cinétique du complexe covalent formé par les aldéhydes tétrapeptides et les protéases à sérine[5].
Actions biochimiques/physiologiques
Ce produit est un mélange d′au moins trois activités caséinolytiques et d′une activité d′aminopeptidase.[8] Les enzymes caséinolytiques correspondent à la protéase A de Streptomyces griseus, la protéase B de Streptomyces griseus et la trypsine de Streptomyces griseus. Ce produit peut être utilisé lorsqu′une dégradation extensive ou complète des protéines est nécessaire. Ce mélange est très peu spécifique et peut digérer la caséine jusqu′à l′obtention de >70 % d′acides aminés individuels.
La protéase dégrade les protéines par hydrolyse des liaisons peptidiques. Les protéases sont inactivées par les inhibiteurs à site actif de sérine, comme le fluorure de phényl méthyl sulfonyle (PMSF) et le di-isopropyl-fluorophosphate. La protéase de Streptomyces griseus est un mélange d′au moins trois activités protéolytiques incluant une sérine protéase extracellulaire. Les sérines protéases sont actives sur une large gamme de substrats, et cette activité est attribuée à un site actif composé d′un résidu Asp, un résidu His et un résidu Ser présents dans la molécule. Cette enzyme hydrolyse préférentiellement les liaisons peptidiques du côté carboxylique de l′acide glutamique ou aspartique.
Caractéristiques et avantages
- très stable dans la gamme de pH comprise entre 5,0 et 9,0 avec une activité optimale à pH 8,8
- compatible avec de nombreux tampons d′isolement de l′ADN et de l′ARN
- accepte un large éventail de substrats
Qualité
Contient de l′acétate de calcium.
Propriétés physiques
Complètement inactivée par chauffage à une température supérieure à 80 °C pendant 15 à 20 minutes.
Définition de l'unité
Une unité hydrolyse la caséine et produit une couleur équivalente à 1,0 μmole (181 μg) de tyrosine par min à pH 7,5 et à 37 °C (couleur obtenue avec le réactif de Folin-Ciocalteu).
Notes préparatoires
Isolée à partir de milieu de culture de S. griseus.
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Réf. du produit
Description
Tarif
Mention d'avertissement
Danger
Mentions de danger
Conseils de prudence
Classification des risques
Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
Organes cibles
Respiratory system
Code de la classe de stockage
11 - Combustible Solids
Classe de danger pour l'eau (WGK)
WGK 2
Point d'éclair (°F)
Not applicable
Point d'éclair (°C)
Not applicable
Équipement de protection individuelle
Eyeshields, Gloves, type N95 (US)
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J Jurásek et al.
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Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 76(1), 96-100 (1979-01-01)
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Arthritis Research & Therapy, 13(3), R81-R81 (2011)
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Is it possible to store P5147 at -80°C after reconstitution?
1 réponse-
Utile ?
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Under what conditions can Product P5147, Protease from Streptomyces griseus, be used to digest protein?
1 réponse-
For DNA isolation, Pronase E is usually prepared as a stock solution, and prior to storage at -20°C, the solution is first heated to 56°C for about 15 minutes, then incubated at 37°C for 1 hour. This encourages self-digestion, to eliminate DNAse and RNAse contamination. The enzyme is added to a DNA sample (in the presence of 0.5-1%(w/v) SDS to disrupt DNA protein interactions) typically at 250-500 μg protein/mL, then incubated at 37°C for 1-4 hours. For protein hydrolysis, dissolve about 0.2 μmol of protein in 0.2 mL of 50 mM ammonium bicarbonate buffer at pH 8 (or phosphate buffer pH 7). Add Pronase to 1% (w/w) and incubate at 37°C for 24 hours. It may be necessary to add aminopeptidase M at 4% (w/w) and incubate at 37°C for another 18 hours.
Utile ?
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Is Product P5147, Protease from Streptomyces griseus, also described as "Pronase"?
1 réponse-
"Pronase E" is the name given to a group of proteolytic enzymes produced by Streptomyces griseus K-1. At least 10 proteases are in the mixture, five serine-type proteases, two zinc endopeptidases, two zinc leucine aminopeptidases, and one zinc carboxypeptidase.
Utile ?
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Does Product P5147, Protease from Streptomyces griseus, contain calcium acetate?
1 réponse-
This product contains calcium acetate buffer salt. The amount of calcium acetate present will vary for each lot number and has been observed to range from 2 - 30% (w/w).
Utile ?
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How should Product P5147, Protease from Streptomyces griseus, be reconstituted and how should a stock solution be prepared?
1 réponse-
This product can be dissolved in 0.01 M sodium acetate with 0.005 M calcium acetate at pH 7.5 at 37°C; at 0.2 mg/mL, this yields a clear solution which ranges from colorless to light tan. Calcium ion is recommended for protection from autolysis. The activity of a dilute enzyme solution containing 0.01 to 0.1 M calcium ion was stable over 24 hours at neutral pH at 2-8°C. Pronase E is stable at 4°C for at least six months. Stock solutions of 5 to 20 mg/mL in water are usually stored at -20°C.
Utile ?
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What is the Department of Transportation shipping information for this product?
1 réponse-
Transportation information can be found in Section 14 of the product's (M)SDS.To access the shipping information for this material, use the link on the product detail page for the product.
Utile ?
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