P8250

Peroxidasa from horseradish

Type II, essentially salt-free, lyophilized powder, 150-250 units/mg solid (using pyrogallol)

• Sinónimos: Donante:peróxido de hidrógeno oxidorreductasa, Peroxidasa de rábano picante
• Número de CAS: 9003-99-0
• Comisión internacional de enzimas: 1.11.1.7 (BRENDA, IUBMB)
• Número CE: 232-668-6
• Número MDL: MFCD00071339
• Código UNSPSC: 12352204
• eCl@ss: 32160410
• NACRES: NA.54

Propiedades

• origen biológico: horseradish
• Nivel de calidad: 300
• tpo: Type II
• Formulario: essentially salt-free, lyophilized powder
• actividad específica: 150-250 units/mg solid (using pyrogallol)
• mol peso: ~44 kDa
• solubilidad: 0.1 M phosphate buffer: soluble (pH 6.0); H₂O: soluble
• cociente de absorbancia: RZ ≥1.8
• aplicaciones: diagnostic assay manufacturing
• temp. de almacenamiento: 2-8°C
• cadena SMILES: [O+H2]O[O-]
• InChI: 1S/H2O3/c1-3-2/h1-2H
• Clave InChI: JSPLKZUTYZBBKA-UHFFFAOYSA-N

Descripción

Descripción general

La peroxidasa de rábano picante se aísla de las raíces de rábano picante (Amoracia rusticana) y pertenece al grupo de ferroprotoporfirina de las peroxidasas. La HRP es un polipéptido monocatenario que contiene cuatro puentes bisulfuro. Es una glucoproteína que contiene un 18 % de carbohidratos. La composición de los carbohidratos consiste en galactosa, arabinosa, xilosa, fucosa, manosa, manosamina y galactosamina dependiendo de la isoenzima específica. Su peso molecular (~44 kDa) incluye la cadena polipeptídica (33 890 dalton), la hemina más Ca²⁺ (~700 dalton) y los carbohidratos (~9 400 dalton). Existen al menos siete isoenzimas de la HRP. El punto isoeléctrico de las isoenzimas de la peroxidasa de rábano picante oscila entre 3,0 y 9,0.

Aplicación

Horseradish peroxidase (HRP) is isolated from horseradish roots (Amoracia rusticana). It is used in biochemistry applications such as western blots, ELISA and Immunohistochemistry. Horseradish peroxidase is used to amplify a weak signal and increase detectability of a target molecule, such as a protein. Horseradish peroxidase, product P8250, has been used to study nonoral antigens in inflamed gingiva[1] and Ebola virus glycoprotein toxicity[2].

The enzyme has been used as a comparison during the peroxidase assay of extract from mature tall fescue leaf blades.[3] It has also been used to measure H₂O₂ production.[4]

Acciones bioquímicas o fisiológicas

HRP readily combines with hydrogen peroxide (H₂O₂) and the resultant [HRP-H₂O₂] complex can oxidize a wide variety of hydrogen donors. The optimal pH is 6.0-6.5 and the enzyme is most stable in the pH range of 5.0-9.0. HRP can be conjugated to antibodies by several different methods including glutaraldehyde, periodate oxidation, through disulfide bonds, and also via amino and thiol directed cross-linkers. It is smaller and more stable than the enzyme labels β-galactosidase and alkaline phosphatase. Hence, it is the most desired label. Also, its glycosylation leads to lower non-specific binding.[5] It is also used for the determination of glucose[6] and peroxides[7] in solution. Sodium azide, cyanide, L-cystine, dichromate, ethylenethiourea, hydroxylamine, sulfide, vanadate, p-aminobenzoic acid, and Cd²⁺, Co²⁺, Cu²⁺, Fe³⁺, Mn²⁺, Ni²⁺, Pb²⁺ ions are found to inhibit the enzyme activity.[8]

When incubated with a substrate, horseradish peroxidase produces a coloured, fluorimetric, or luminescent derivative of the labeled molecule, allowing quantification. Horseradish peroxidase has been shown to slightly reduce the level of inhibition in a cydAB mutant.

Calidad

Preliminary work shows it to contain at least five isoenzymes.

Definición de unidad

Una unidad de pirogalol formará 1,0 mg de purpurogalina a partir de pirogalol en 20 segundos a pH 6,0 a 20 °C.

Nota de análisis

La RZ (Reinheitszahl) es la relación de absorbancia A₄₀₃/A₂₇₅ determinada a 0,5-1,0 mg/ml en agua desionizada. Es una medida del contenido de hemina, no de la actividad enzimática. Incluso preparaciones con RZ elevada pueden tener una actividad enzimática baja.

Otras notas

Véase más información sobre la peroxidasa en www.sigma-aldrich.com/enzymeexplorer.

Información de seguridad

• Pictogramas: GHS08
• Palabra de señalización: Danger
• Frases de peligro: H334
• Consejos de prudencia: P261 - P284 - P501
• Clasificaciones de peligro: Resp. Sens. 1
• Código de clase de almacenamiento: 13 - Non Combustible Solids
• Clase de riesgo para el agua (WGK): WGK 1
• Equipo de protección personal: Eyeshields, Gloves, type N95 (US)