This product is soluble in 0.15 M NaCl at 5 mg/mL. Solutions prepared at 10 mg/mL in 0.15 M NaCl may lose up to 10% activity when stored for 1 week in aliquots at –20 °C. The same solutions stored in aliquots at 2-8 °C can lose up to 20% activity. Please see the link below to review the product datasheet for additional information:
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DN25
Desoxirribonucleasa I from bovine pancreas
Deoxyribonuclease I from bovine pancreas
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lyophilized powder, Protein ≥85 %, ≥400 Kunitz units/mg protein
Sinónimos:
Desoxirribonucleasa, ADNasa I, Desoxirribonucleato 5′-oligonucleótido-hidrolasa
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About This Item
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Productos recomendados
origen biológico
bovine pancreas
Nivel de calidad
Formulario
lyophilized powder
actividad específica
≥400 Kunitz units/mg protein
mol peso
~31 kDa
composición
Protein, ≥85%
técnicas
DNA extraction: suitable
solubilidad
0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, hazy
idoneidad
suitable for molecular biology
aplicaciones
diagnostic assay manufacturing
diagnostic assay manufacturing
actividad extraña
RNase ≤0.02%
Condiciones de envío
wet ice
temp. de almacenamiento
−20°C
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Descripción general
La ADNasa I, o desoxirribonucleasa I, es una endonucleasa aislada del páncreas bovino.
- Nuestra ADNasa I digiere ADN bicatenario y monocatenario en oligonucleótidos y mononucleótidos.
- La ADNasa pancreática bovina existe como cuatro isoenzimas, con puntos isoeléctricos para A, B, C y D: 5,22, 4,96, 5,06 y 4,78.3. La forma predominante es la A, con cantidades menores de B y C, y sólo una cantidad mínima de D.
- La estructura de la ADNasa I se parece a la estructura de la exonucleasa III Incluye dos láminas ß centrales. Cada lámina β está compuesta por seis cadenas-β. Este complejo de láminas β está rodeado por un extenso lazo y regiones α-helicoidales. Esta enzima comparte semejanza estructural con la exonucleasa III.[1]
Aplicación
- Reduce la viscosidad proporcionando mejores rendimientos mediante la eliminación del ADN en el aislamiento de células primarias:
- Incorporando bases marcadas en el ADN: Muesca de ADN
- Marcaje radiactivo
- Aplicaciones de bioprocesamiento: Extracción del ADN
- Eliminar el ADN genómico de las preparaciones de ARN antes de una RT-PCR
- Transcripción in vitro
- Desplazamiento de muescas
- Huella de ADNasa
- Regulación de la polimerización de la actina en las células, y apoptosis celular
- Entrecruzamiento UV de proteínas con ácidos nucleicos
- La ADNasa desempeña un papel en la regulación de la polimerización de la actina en las células y participa en el proceso de la apoptosis [1]
Utilizado para eliminación del ADN de las muestras proteicas.
Acciones bioquímicas o fisiológicas
La ADNasa I es una endonucleasa que actúa sobre los enlaces fosfodiéster adyacentes a pirimidinas para producir polinucleótidos con 5′-fosfatos terminales. En presencia de Mg2+, la ADNasa I escinde cada hebra de ADN independientemente y los sitios de rotura son aleatorios. Las dos hebras de ADN se rompen aproximadamente en el mismo sitio en presencia de Mn2+.[1] Cationes divalentes como Mn2+, Ca2+, Co2+ y Zn2+ son activadores de la enzima. Una concentración de Ca2+ 5 mM estabiliza la enzima contra la digestión proteolítica. Se observó que el pH óptimo se encontraba entre 7 y 8.[2] La ADNasa I de páncreas bovino consta de cuatro componentes distinguibles mediante cromatografía, el A, el B, el C y el D, en proporciones molares de 4:1:1. Sólo se encuentran cantidades menores del componente D.[3] Se sabe que el 2-mercaptoetanol, los quelantes, el dodecilsulfatosódico (SDS)[4] y la actina[5] inhiben la actividad de la enzima.
Características y beneficios
Nuestra desoxirribonucleasa ADNasa I es esencialmente un producto exento de ARNasa, que admite la aplicación del producto.
Definición de unidad
Una unidad Kunitz producirá un cambio en A260 de 0,001 por minuto por ml a pH 5,0 y 25 °C, utilizando como sustrato ADN de tipo I o III.
Forma física
Preparación en bruto, contiene cloruro de calcio
Nota de preparación
Una disolución de 10 mg/ml de ADNasa I en NaCl 0,15 M pierde un <10% de su actividad cuando se almacena durante una semana en alícuotas a −20 °C. Las mismas disoluciones conservadas en alícuotas a 2-8 °C pueden perder aproximadamente un 20 % de actividad. Permanece activa durante un máximo de cinco horas a 60 °C a un pH comprendido entre 5 y 7, y pierde actividad en <10 minutos a 68 °C. Pierde actividad a un ritmo de un 6%/hora en tampón acetato (pH 5,0) y tampón tris (pH 7,2) a una concentración de 1 mg/ml.
Nota de análisis
Proteína determinada mediante Biuret
Inhibidor
Referencia del producto
Descripción
Precios
Palabra de señalización
Danger
Frases de peligro
Consejos de prudencia
Clasificaciones de peligro
Resp. Sens. 1
Código de clase de almacenamiento
11 - Combustible Solids
Clase de riesgo para el agua (WGK)
WGK 3
Punto de inflamabilidad (°F)
Not applicable
Punto de inflamabilidad (°C)
Not applicable
Equipo de protección personal
Eyeshields, Gloves, type N95 (US)
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What is the recommended method for long-term storage of the 1 gram bottle of DN25 in solution?
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The user bulletin provides guidance on the storage of DNase I once reconstituted. When stored in aliquots at -20°C, solutions of DNase I at 10 mg/mL in 0.15 M NaCl may lose 10% of activity over a week, while storing the same solutions at 2–8°C can result in a 20% activity loss. Alternatively, maintaining solutions at a minimum concentration of 1 mg protein/mL with 5 mM calcium chloride at -20°C can retain 90% activity for at least a year. Solutions with 0.1 mg protein/mL are less stable and may need gelatin as a stabilizer.
For applications not affected by glycerol, two storage buffer options are available as they do not freeze at -20°C:
• 20 mM sodium acetate (pH 6.5) with 5 mM CaCl2, 0.1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF), and 50% (v/v) glycerol, containing DNase I at 5 mg/mL.
• 10 mM Tris-HCl (pH 7.5) with 50 mM NaCl, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, and 50% (v/v) glycerol, with DNase I at 2 mg/mL.¿Le ha resultado útil?
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Hi I use the DNase during isolation of cells from lung tissue. Do I need to filter the DNase solution before usage?
1 respuesta-
This is not a sterile product. If sterility is required due to the specific application, solutions may be filter sterilized before use. Please see the link below to review the product datasheet:
https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/233/818/dn25pis-ms.pdf¿Le ha resultado útil?
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I use the DNase when I isolate lung cells from lung. Do I need to filter them before I use? I will culture the isolated lung cells.
1 respuesta-
Yes, please filter the DNase solution before use in cell culture, preferably with a 0.22 um filter. The powder is not sterilized as provided.
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