TRANSRTRO

Transcriptasa inversa Transcriptor

• Código UNSPSC: 41106313
• NACRES: NA.21

Propiedades

• recombinante: expressed in E. coli
• Nivel de calidad: 100
• Análisis: ≥90% (SDS-PAGE)
• formulario: liquid
• uso: sufficient for 25 reactions; sufficient for 50 reactions; sufficient for 500 reactions
• actividad específica: 0.05 U/mg
• Características: dNTPs included: no; hotstart: no
• fabricante / nombre comercial: Roche
• envase: pkg of 200 reactions (03531287001); pkg of 25 reactions (03531317001); pkg of 50 reactions (03531295001)
• técnicas: RT-PCR: suitable; RT-qPCR: suitable
• color: colorless
• pH: 7.2
• solubilidad: water: miscible
• idoneidad: suitable for molecular biology
• Nº de acceso UniProt: Q9JG39
• aplicaciones: genomic analysis; life science and biopharma
• método de detección: probe-based
• actividad extraña: DNase activity, none detected; Nicking activity, none detected; RNase activity, none detected
• temp. de almacenamiento: −20°C (−15°C to −25°C)

Descripción

Descripción general

En los retrovirus como el virus de la inmunodeficiencia humana de tipo 1 (HIV-1), la transcriptasa inversa (RT) es la enzima nuclear. La transcriptasa inversa del VIH-1 está constituida por dos subunidades, de 66 kDa y 51 kDa (p66 y p5l). Un retrovirus endógeno humano de la familia HERV-K codifica la enzima transcriptasa inversa (RT).

Una transcriptasa inversa recombinante para la transcripción robusta de fragmentos de ARN de hasta 14 kb utilizada en RT-PCR en dos etapas en cicladores térmicos y en instrumentos de PCR en tiempo real.

Aplicación

La transcriptasa inversa Transcriptor está diseñada para transcribir ARN (ARNm, ARN total, ARN vírico y ARN transcrito in vitro) de una variedad de fuentes, utilizando cicladores térmicos convencionales e instrumentos de PCR en tiempo real (por ejemplo, los instrumentos LightCycler^®) para las siguientes aplicaciones:

• Síntesis de la cadena primaria del ADNc para utilizar en reacciones de amplificación subsiguientes
• RT-PCR de moldes de ARN rico en GC
• Marcaje con Cy3, Cy5, DIG, biotina o aminoalilo durante la síntesis de ADNc
• Recuperación y clonado de extremos 5′ y 3′ de ARNm mediante RACE
• Generación de bancos de ADNc con insertos largos
• Secuenciación de disoxi ADN
• secuenciación de ARN
• marcaje del extremo 3′ de los fragmentos de ADN
• Generación de sondas monocatenarias para huellas genómicas
• En la transcripción inversa del ARN del virus del papiloma humano E6, tejidos corticales y estriados, biopsias musculares de muestras de la distrofia muscular de Becker y tallo-bucle de miRNA de ovocitos y células endoteliales microvasculares cerebrales humanas (hCMVEC)

Acciones bioquímicas o fisiológicas

La transcriptasa inversa del virus de la inmunodeficiencia humana 1 (VIH-1 RT) es esencial para la conversión catalítica del ARN vírico monocatenario en el ADN lineal bicatenario que se integra en los cromosomas de la célula huésped.

Características y beneficios

• Consigue una gran sensibilidad en RT-PCR en dos etapas.

La transcriptasa inversa Transcriptor se utiliza en cicladores térmicos convencionales y en instrumentos de PCR en tiempo real (por ejemplo, los instrumentos LightCycler^®).

• Obtiene más transcritos de longitud completa, de hasta 14 kb.

Pueden generarse bancos de ADNc con insertos largos.

• Realiza transcripción inversa de plantillas difíciles.

La enzima funciona bien a temperaturas elevadas, evitando así la estructura secundaria del ARN (por ejemplo, plantillas de ADN ricas en GC) y facilitando condiciones de reacción óptimas.

• Marca con eficacia el ADNc.

Durante la síntesis de ADNc se incorporan nucleótidos marcados con Cy3, Cy5, DIG, biotina o aminoalilo.

Componentes

• Transcriptasa inversa Transcriptor, en tampón de almacenamiento
• Tampón RT Transcriptor, concentrado x5

Calidad

La función de cada lote de transcriptasa inversa Transcriptor se prueba de manera sistemática mediante RT-PCR:

• con un ciclador térmico convencional para detectar un fragmento de 10 kb del gen de la distrofina humana, empezando por el ARN total de músculo esquelético humano.
• Con el instrumento LightCycler^® para detectar copias de 5 x 10² a 5 x 10⁶ de ARN de PBGD humano transcrito in vitro. Los resultados se definen en puntos de cruce fijos e intensidad de fluorescencia fija.

Nota de preparación

Volumen de actividad: 20 U/μl.
Transcripción de dianas de ARN largas, raras o difíciles.
La transcriptasa inversa Transcriptor se recomienda para RT-PCR de:

• dianas largas, porque puede transcribir plantillas de ARN de hasta 14 kb
• dianas raras, porque tiene gran sensibilidad
• dianas ricas en GC, porque puede funcionar a temperaturas elevadas (hasta +65^oC) para eliminar los problemas asociados con estructuras secundarias extensas

Etiquetado para muchas aplicaciones
La transcriptasa inversa Transcriptor también está recomendada para preparar ADNc marcado, ya que acepta una amplia variedad de nucleótidos modificados (como dNTP marcados con Cy3, Cy5, DIG, biotina o aminoalilo).
Requisitos de la reacción
Transcriptor acepta moldes de ARN monocatenario (ssRNA) y ADN monocatenario (ssDNA) y requiere un cebador para la transcripción.

Almacenamiento y estabilidad

Evite la congelación y descongelación repetidas.

Otras notas

Sólo para investigación en ciencias de la vida. No indicada para procedimientos de diagnóstico.

Información legal

LightCycler is a registered trademark of Roche

Información de seguridad

• Código de clase de almacenamiento: 12 - Non Combustible Liquids
• Clase de riesgo para el agua (WGK): WGK 1
• Punto de inflamabilidad (°F): does not flash
• Punto de inflamabilidad (°C): does not flash