11888412001

PCR-Nukleotid-Mix^PLUS

solution, Roche, pkg of 2 × 100 μL (10 mM each), suitable for RT-PCR

• Synonym(e): PCR | Nucleotid
• UNSPSC-Code: 41116100

Eigenschaften

• Form: solution
• Qualitätsniveau: 100
• Verwendung: sufficient for 500 reactions
• Verpackung: pkg of 2 × 100 μL (10 mM each)
• Hersteller/Markenname: Roche
• Methode(n): RT-PCR: suitable
• Farbe: colorless
• Löslichkeit: water: miscible
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

PCR-Nukleotid-Mix^PLUS ist eine klare, farblose Lösung der Natriumsalze von dATP, dCTP und dGTP, jeweils in einer Konzentration von 10 mM, und dUTP in einer Konzentration von 30 mM in Wasser von PCR-Qualität. Diese Nukleotidmischung kann Polymerase-Kettenreaktionen direkt zugesetzt werden.
Durch den Einbau von dUTP anstelle von dTTP können kontaminierende PCR-Produkte aus früheren Reaktionen mit Uracil-DNA-Glykosylase (UNG) direkt abgebaut werden, um eine Kontaminationsverschleppung aus früheren Amplifikationen zu verhindern.

Anwendung

• Diese gebrauchsfertige Nukleotidmischung ist eine vorgemischte Lösung der Natriumsalze von dATP, dGTP und dCTP, jeweils in einer Konzentration von 10 mM, und dUTP in einer Konzentration von 30 mM in Wasser. Dieser Mix ist zur Verwendung in allen Arten von Amplifikationsreaktionen optimiert: PCR
• RT-PCR
• Vermeidung von Kontaminationsverschleppung

Um eine Dekontamination der PCR oder RT-PCR zu ermöglichen, wird dUTP anstelle von dTTP in das PCR-Produkt eingebaut. Nachfolgende Reaktionen können dann mit Uracil-DNA-Glykosylase (UNG) behandelt werden. Um ein erneutes Öffnen des Reaktionsgefäßes zu vermeiden, werden die Gefäße bei +20 °C inkubiert, was zum Abbau von potenziell kontaminierenden uracilhaltigen Amplifikationsprodukten führt. Während dieses Schrittes bleiben Template-DNA und -RNA unbeeinflusst, da normale DNA kein Uracil enthält und RNA nicht als Substrat für UNG dient. Vor dem Start des eigentlichen Thermocycling-Programms wird UNG durch Inkubation bei +95 °C inaktiviert. Besonders sinnvoll ist die hitzelabile Uracil-DNA-Glykosylase, die bereits nach einer zweiminütigen Inkubation bei +95 °C vollständig inaktiviert ist. Das natürliche Enzym aus E. coli erfordert eine 10-minütige Inkubation der Reaktionsmischung bei +95 °C. Die kürzere Wärmebehandlung führt zu einer deutlichen Reduzierung des Risikos des Verlustes der Template-Nukleinsäure, die typischerweise nur in geringen Konzentrationen vorliegt. Dies ist besonders wichtig bei der Durchführung einer RT-PCR. Daher empfehlen wir die Verwendung von Uracil-DNA-Glykosylase.
Es wird im LightCycler-PCR-Assay zur Identifizierung von B. pertussis und B. parapertussis in nasopharyngealen Abstrichen eingesetzt.[1] Es wird ebenfalls in quantitativen PCR-Assays (qPCR-Assays) verwendet.[2]

Leistungsmerkmale und Vorteile

PCR-Nukleotid-MixPLUS kann Amplifikationsreaktionen direkt zugegeben werden. Nukleotide in PCR-Qualität von Roche werden speziell hergestellt und bis zum höchstmöglichen chemischen Reinheitsgrad gereinigt. Mit diesen lassen sich auch geringe Mengen an Template-RNA und -DNA amplifizieren.
Bessere Ausbeute und Leistung

• Praktischer gebrauchsfertiger Mix mit allen 4 Nukleotiden.
• Höchste PCR- und RT-PCR-Empfindlichkeit.
• Nukleotide höchster Reinheit (>99 %)

Verpackung

1 Set mit 4 gebrauchsfertigen Mischungen

Qualität

In der PCR funktionsgeprüft zur Sicherstellung einer spezifischen DNA-Amplifikation. Die Dekontamination mit UNG ist nachgewiesen. Nach Maßgabe der aktuellen Qualitätskontrollverfahren sind keine RNasen oder DNasen nachweisbar.

Sonstige Hinweise

Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht für den Einsatz in diagnostischen Verfahren geeignet.

Nur Kit-Komponenten

• dATP, PCR Grade, sodium salt 10 mM
• dCTP, PCR Grade, sodium salt 10 mM
• dGTP, PCR Grade, sodium salt 10 mM
• dUTP, PCR Grade, sodium salt 10 mM

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash