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Magna MeRIP m6A-Kit - transkriptomweite Profilerstellung von N6-Methyladenosin

• Synonym(e): Magna-MeRIP-m6A-Kit, m6A-Profilerstellungskit
• UNSPSC-Code: 41105331
• NACRES: NA.84

Eigenschaften

• Qualitätsniveau: 300

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

N6-Methyladenosin (m6A) repräsentiert eine reichlich vorkommende RNA-Modifikation, die in vielen Spezies konserviert ist, von Pflanzen über Hefe bis zu Säugetieren. Ähnlich wie die 5-Methylcytosin(5-mc)-Modifikation von DNA ist m6A eine reversible chemische Modifikation von RNA. m6A-RNA-Modifikationen sind ein Zukunftsthema beim Steuern der Zellschicksalsübergänge in embryonalen Stammzellen von Säugetieren. m6A ist eine der häufigsten Modifikationen an sowohl mRNA als auch nichtkodierender RNA in Eukaryoten mit geschätzt 12.000 m6A-Stellen in mehr als 7.000 Genen. Die Markierung wird durch ein Heterodimer aus Mettl3 und Mettl14 (methyltransferase-like 3 und 14) abgelagert und kann durch die RNA-Demethylaseenzyme FTO und ALKBH5 entfernt werden. Das Risikogen für Adipositas, FTO, kodiert die erste identifizierte m6A-Demethylase. Mutationen an FTO sind mit einem erhöhten Risiko für Adipositas und Typ-II-Diabetes assoziiert. Kürzlich führte die Beeinträchtigung des Zustands der m6A-Regulation zu einer verlängerten Expression von Nanog in ES-Zellen und dem Unvermögen aus den Selbsterneuerungsstufen in die Differenzierung auszutreten.

Methylierte (m6A) RNA-Immunpräzipitation (MeRIP) ist ein Verfahren zum Überwachen des Zustands von m6A und zum Lokalisieren von m6A-RNA-Modifikationen im gesamten Transkriptom. Das Magna MeRIP-m6A-Kit nutzt das MeRIP-Verfahren, um die Identifizierung und transkriptomweite Profilerstellung von m6A-RNA-Modifikationen zu ermöglichen. Im MeRIP-Assay wird die RNA chemisch in 100 Nukleotide oder kleinere Fragmente fragmentiert, gefolgt von einer magnetischen Immunpräzipitation mit einem monoklonalen Antikörper gegen m6A. Nach der Immunpräzipitation können isolierte RNA-Fragmente einer qRT-PCR oder RNA-Sequenzierung (MeRIP-seq) unterzogen werden. Das optimierte Protokoll ist leicht zu verarbeiten und kann Ergebnisse mit hohen SN-Verhältnissen liefern.

Anwendung

Das Magna MeRIP-m6A-Kit optimiert das MeRIP-Verfahren (methylierte RNA-Immunpräzipitation), um die Identifizierung und transkriptomweite Profilerstellung von m6A(N6-Methyladenosin)-RNA-Methylierungsstellen zu ermöglichen. Geeignet für MeRIP-seq und qRT-PCR von methylierten RNA-Transkripten.

Komponenten

RNA-Fragmentierungspuffer 10X (0,5 ml), 0,5 mol/l EDTA (0,5 ml), IP-Puffer 5X (15 ml), Mischung aus magnetischen A/G-Beads (315 μl), Anti-N6-Methyladenosin (m6A), Klon 17-3-4-1 (100 μg), RNase-Inhibitor (90 μl), N6-Methyladenosin, 5‘-Monophosphatnatriumsalz (m6A) (10 mg), normales Maus-IgG (125 μg), für humanes EEF1A1 positive MeRIP-Primer (75 μl), für humanes EEF1A1 negative MeRIP-Primer (75 μl)

Haftungsausschluss

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Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS07
• Signalwort: Warning
• H-Sätze: H315,H319,H412
• P-Sätze: P264 - P273 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338 - P332 + P313
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• Lagerklassenschlüssel: 10 - Combustible liquids