Primární buňky epitelu dýchacích cest

Tyto produkty jsou dostupné v USA, Kanadě a vybraných evropských zemích.

• Systém pro kultivaci epitelových buněk dýchacích cest
• Systém kontroly kvality pro kultivaci epitelových buněk dýchacích cest
• .Materiály pro kultivaci buněk epitelu dýchacích cest

Primární systém pro kultivaci buněk epitelu dýchacích cest u člověka

Epitel je rozhraní mezi tělem a vnějším prostředím a pokrývá všechny vnější povrchy a vnitřní lumina. Mezi rozmanité funkce epitelových buněk patří absorpce, sekrece, ochrana, transcelulární transport a vnímání.

PromoCell^® epitelové buňky dýchacích cest jsou izolovány z normálních lidských dospělých tkání velkých dýchacích cest včetně nosní sliznice, průdušnice a průdušek. Krátce po izolaci jsou všechny lidské epitelové buňky dýchacích cest kryokonzervovány v pasáži 2 (P2) pomocí patentovaného mrazicího média bez obsahu séra, Cryo-SFM. Po rozmrazení obsahuje každá kryovialka nejméně 500 000 životaschopných buněk. Lidské epitelové buňky jsou k dispozici také jako proliferující buněčné kultury vyrobené z kryokonzervovaných buněk, které byly rozmraženy a kultivovány po dobu tří dnů.

• Protokol kultivace lidských epiteliálních buněk dýchacích cest

Prostředí pro růst epiteliálních buněk dýchacích cest je bezsérové růstové médium optimalizované pro kultivaci epiteliálních buněk z velkých dýchacích cest in vitro. Růstové médium pro epitelové buňky dýchacích cest je optimalizováno pro pěstování primárních lidských buněk, ale lze jej použít i pro epitelové buňky dýchacích cest koní, prasat, myší, netopýrů a potkanů. Toto médium je k dispozici ve dvou variantách: Médium (připravené k použití) a sada médií. Varianta média (připraveného k použití) se skládá z 500ml lahvičky základního média a jedné lahvičky SupplementMix. Sada média se skládá z 500 ml lahvičky bazálního média a sady SupplementPack (sada jednotlivých lahviček s předem odměřenými doplňky), která dává uživateli plnou kontrolu nad složením média. Přidáním směsi SupplementMix nebo balení SupplementPack k základnímu médiu získáte kompletní médium pro růst epitelových buněk dýchacích cest. Základní médium (s fenolovou červení nebo bez ní), SupplementMix a SupplementPack lze zakoupit také samostatně.

Prostředí pro růst buněk dýchacích cest je doporučeno pro

• Lidské nosní epitelové buňky (HNEpC)
• Lidské bronchiální epitelové buňky (HBEpC)
• Lidské tracheální epitelové buňky (HTEpC)
• /li>

Podrobnosti o doplňcích růstového média pro epitelové buňky dýchacích cest

Růstové médium pro epitelové buňky dýchacích cest obsahuje všechny růstové faktory a doplňky potřebné pro optimální růst lidských epitelových buněk dýchacích cest. Patří mezi ně epidermální růstový faktor, inzulín a transferin (viz tabulka níže). Médium pro růst buněk epitelu dýchacích cest neobsahuje antibiotika ani antimykotika a je určeno k použití v inkubátoru s atmosférou 5 % CO₂

Koncentrace doplňků média pro růst buněk epitelu dýchacích cest (po přidání)

.

Složka	Konečná koncentrace
Extrakt z hovězí hypofýzy	0.004 ml / ml
Epidermální růstový faktor (rekombinantní lidský)	10 ng/mL
Insulin (rekombinantní lidský)	5 μg / ml
Hydrokortizon	0.5 μg / ml
Epinefrin	0.5 μg / ml
Trijodo-L-thyronin	6.7 ng / ml
Transferrin (rekombinantní lidský)	10 μg / ml
Kyselina retinová	0.1 ng / ml

Příprava doplňkového média pro primární epitelové buňky dýchacích cest

• Přípravek Airway Epithelial Growth Medium SupplementMix nebo SupplementPack rozmrazte při teplotě 15-25 °C.
• Asepticky promíchejte roztoky doplňků opatrným pipetováním nahoru a dolů.
• Přeneste celý obsah každého doplňku do základního média pro růstové buňky dýchacích cest.
• Lahvičku uzavřete a jemně vířete, dokud nedosáhnete homogenní směsi.

Skladování a stabilita produktů pro Airway Epithelial Cell

• Po příjezdu ihned skladujte Airway Epithelial Cell Basal Medium při teplotě 4 - 8 °C ve tmě; médium nemrazte. Airway Epithelial Cell Growth Medium SupplementMix nebo SupplementPack skladujte při -20 °C.
• Přípravky jsou stabilní do data použitelnosti uvedeného na etiketě, pokud jsou skladovány podle pokynů.
• Po přidání doplňků k Airway Epithelial Cell Basal Medium je doba použitelnosti celého média šest týdnů při teplotě 4 - 8 °C. Kompletní médium nezmrazujte.
• Pro použití předehřejte alikvotní část kompletního média pro růst buněk dýchacích cest a zbývající médium uchovávejte při teplotě
  4 - 8 °C.
• Po dodání by měly být kryokonzervované buňky uchovávány v tekutém dusíku nebo sazeny přímo.
• Proliferující buňky musí být zpracováno okamžitě.

Kontrola kvality systému pro kultivaci epitelových buněk dýchacích cest

Kontrola kvality lidských primárních buněk epitelu dýchacích cest

Pro každou šarži buněk epitelu dýchacích cest se provádějí následující testy přísné kontroly kvality:

• Testování morfologie buněk, míry adherence a životaschopnosti buněk
• Průtokové cytometrické analýzy pro marker cytokeratin specifický pro daný buněčný typ
• Testování růstové výkonnosti prostřednictvím více pasáží, až 15 zdvojení populace (PD) v kultivačních podmínkách bez antibiotik a antimykotik
• Testování růstu v několika pasážích, až do 15 zdvojení populace (PD)/li>
• Testování na nepřítomnost HIV-1, HIV-2, HBV, HCV, HTLV-1, HTLV-2 a mikrobiálních kontaminantů (plísní, bakterií a mykoplazmy)
• Pro každou šarži je k dispozici podrobný certifikát analýzy (CoA).

Specifikace buněk epitelu dýchacích cest

Výrobek	Hustota obalu	Průchodnost po rozmrazení	Marker	Podvojení populace
Lidské nosní epitelové buňky (HNEpC)	10 000 - 15 000 buněk na cm²	Cytokeratin+	> 15
Lidské tracheální epitelové buňky (HTEpC)	10 000 - 15 000 buněk na cm²	P2	Cytokeratin+	> 15
Buňky bronchiálního epitelu člověka (HBEpC)	10 000 - 15 000 buněk na cm²	P2	Cytokeratin+	> 15

Kontrola kvality média pro růst primárních epiteliálních buněk

Všechny šarže média PromoCell^® Airway Epithelial Cell Growth Medium jsou podrobeny komplexním testům kontroly kvality s použitím primárních lidských epiteliálních buněk dýchacích cest. U každé šarže se kontroluje aktivita podporující růst, míra adherence a typická morfologie testovaných buněk. Jako reference se používají schválené interní šarže Airway Epithelial Cell Growth Media. Kromě toho je každá šarže média testována na nepřítomnost mikrobiálních kontaminantů (plísně, bakterie, mykoplazma).

Předpokládané použití produktů pro růst buněk epitelu dýchacích cest

Tyto produkty jsou určeny pouze pro in vitro použití a nejsou určeny k diagnostickým nebo terapeutickým postupům. Bezpečnostní opatření naleznete v příslušném bezpečnostním listu.

Poznámka: Vzhledem k nízkému obsahu séra nebo jeho absenci nejsou média PromoCell vhodná pro trypsinovou neutralizaci (například při subkultivaci buněk). Místo toho doporučujeme použít naši sadu DetachKit (C-41200, .C-41210, C-41220), který obsahuje HEPES BSS, Trypsin/EDTA a Trypsin Neutralizační roztok.

Materiály pro kultivaci buněk epitelu dýchacích cest