Systém pro kultivaci primárních lidských epidermálních keratinocytů

Tyto produkty jsou dostupné v USA, Kanadě a vybraných evropských zemích.

• Systém pro kultivaci lidských epidermálních keratinocytů
• Kontrola kvality pro primární systém pro kultivaci lidských epidermálních keratinocytů
• Materiály pro primární kultivaci keratinocytů

Systém pro kultivaci epidermálních keratinocytů člověka

Epidermální keratinocyty tvoří přibližně 90 % buněk epidermis. Keratinocyty vznikají ve stratum basale a migrují do stratum corneum, nejzevnější bariérové vrstvy kůže. Během procesu postupné diferenciace procházejí keratinocyty významnými morfologickými změnami a nakonec se z nich stávají bezjaderné, ploché a vysoce keratinizované dlaždicové buňky stratum corneum.

PromoCell^® Normální lidské epidermální keratinocyty jsou k dispozici od jednotlivých nebo sdružených dárců. Buňky jsou izolovány z juvenilní předkožky nebo z dospělé normální lidské tkáně odebrané z různých míst, mezi něž patří obličej, prs, břicho a stehno. Krátce po izolaci jsou normální lidské epidermální keratinocyty kryokonzervovány v pasáži 2 (P2) pomocí patentovaného mrazicího média bez séra, Cryo-SFM. Každá rozmražená kryovialka obsahuje nejméně 500 000 životaschopných buněk. Normální lidské epidermální keratinocyty jsou k dispozici také jako proliferující buněčné kultury vytvořené z kryokonzervovaných buněk, které byly rozmraženy a poté kultivovány po dobu tří dnů.

Protokol kultivace normálních lidských epidermálních keratinocytů

Keratinocytární růstové médium 2 je bezsérové médium optimalizované pro kultivaci epidermálních keratinocytů in vitro bez napájecích buněk. Médium lze také použít ke kultivaci koňských, prasečích, myších a potkaních keratinocytů (s příslušnou úpravou koncentrace chloridu vápenatého podle potřeby). Růstové médium pro keratinocyty 2 je také vhodné pro keratinocyty rohovky potkana.

Růstové médium pro keratinocyty 2 je k dispozici ve dvou formátech: Varianta média (připraveného k použití) obsahuje 500 ml lahvičku bazálního média a jednu lahvičku SupplementMix. Sada Medium Kit obsahuje 500ml láhev bazálního média a SupplementPack, což je sada jednotlivých lahviček s předem odměřenými doplňky, která dává uživateli plnou kontrolu nad složením média. Přidáním směsi SupplementMix nebo balení SupplementPack k základnímu médiu vznikne kompletní růstové médium pro keratinocyty 2. Základní médium (s fenolovou červení nebo bez ní), SupplementMix a SupplementPack lze zakoupit také samostatně.

Keratinocyte Growth Medium 2 is recommended for

• Normal Human Epidermal Keratinocytes (NHEK), juvenile foreskin
• Normal Human Epidermal Keratinocytes (NHEK), adult donor

Podrobnosti o doplňku růstového média pro keratinocyty 2

Růstové médium pro keratinocyty 2 obsahuje všechny složky nezbytné pro optimální růst lidských keratinocytů. Patří mezi ně extrakt z hovězí hypofýzy, epidermální růstový faktor, inzulín a transferin (podrobnosti viz tabulka níže). Růstové médium pro keratinocyty 2 neobsahuje antibiotika ani antimykotika a je určeno k použití v inkubátoru s 5% obsahem atmosférického CO₂.

Konečné koncentrace doplňků v růstovém médiu pro keratinocyty (po přidání)

Složka	Konečná koncentrace
Extrakt z hovězí hypofýzy	0.004 ml / ml
Epidermální růstový faktor (rekombinantní lidský)	0.125 ng / ml
Insulin (rekombinantní lidský)	5 μg / ml
Hydrokortizon	0.33 μg / ml
Epinefrin	0.39 μg / ml
Transferrin (rekombinantní lidský)	Přenosová látka (rekombinantní lidská)
CaCl2	0.06 mM

Příprava doplňkových médií pro lidské epidermální keratinocyty

• Růstové médium pro keratinocyty 2 SupplementMix nebo SupplementPack rozmrazte při teplotě 15 - 25 °C.
• Asepticky promíchejte roztoky doplňků jemným pipetováním nahoru a dolů.
• Přeneste celý obsah každého doplňku do základního média pro keratinocyty.
• Lahvičku uzavřete a jemně ji promíchejte, aby vznikla homogenní směs.

Skladování a stabilita produktů primárních lidských epidermálních keratinocytů a růstových médií pro keratinocyty

• Po příchodu ihned skladujte Keratinocyte Basal Medium ve tmě při teplotě 4 - 8 °C; nemrazte. Keratinocyte Growth Medium SupplementMix nebo SupplementPack skladujte při -20 °C.
• Při správném skladování jsou produkty stabilní až do data použitelnosti uvedeného na etiketě.
• Po přidání doplňků do Keratinocyte Basal Medium je doba použitelnosti celého média šest týdnů při teplotě 4 - 8 °C. Kompletní médium nezmrazujte.
• Pro použití předehřejte pouze požadovanou alikvotní část kompletního Keratinocytárního růstového média a zbývající médium uchovávejte v chladu při teplotě 4 - 8 °C.
• Po příjezdu uchovávejte kryokonzervované buňky v tekutém dusíku nebo je přímo vysaďte.
• Proliferující buňky musí být zpracovány ihned po příjezdu.

Kontrola kvality primárních lidských epidermálních keratinocytů a růstových médií pro keratinocyty./h2>

Kontrola kvality primárních lidských epidermálních keratinocytů

Následující testy přísné kontroly kvality jsou prováděny u každé šarže lidských epidermálních keratinocytů:

• Testování morfologie buněk, míry adherence a životaschopnosti buněk
• Imunohistochemické testování markeru cytokeratinu specifického pro daný buněčný typ
• Testování růstové výkonnosti prostřednictvím více pasáží až do 15 zdvojení populace (PD) za kultivačních podmínek bez antibiotik a antimykotik.
• Testování na nepřítomnost HIV-1, HIV-2, HBV, HCV, HTLV-1, HTLV-2 a mikrobiálních kontaminantů (plísní, bakterií a mykoplazmy)
• Podrobný certifikát analýzy (CoA) pro každou šarži je k dispozici ke stažení.

Specifikace normálních lidských epidermálních keratinocytů

Výrobek	Hustota obalu	Průchodnost po rozmrazení	Marker	Podvojení populace
Normální lidské epidermální keratinocyty (NHEK), juvenilní předkožka, jeden dárce	5 000 buněk na cm²	P2	Cytokeratin+	> 15
Normální lidské epidermální keratinocyty (NHEK), juvenilní předkožka, sdružené	5 000 buněk na cm²	P2	Cytokeratin+	> 15
Normální lidské epidermální keratinocyty (NHEK), dospělé, jeden dárce	5 000 buněk na cm²	P2	Cytokeratin+	> 15
Normální lidské epidermální keratinocyty (NHEK), dospělé, sdružené	5 000 buněk na cm²	P2	Cytokeratin+	> 15

Kontrola kvality růstového média pro keratinocyty 2

Všechny šarže růstového média pro keratinocyty 2 jsou podrobeny komplexnímu testování kvality. Testy kontrolují aktivitu podporující růst, míru adherence a typickou morfologii primárních lidských keratinocytů. Jako reference se používají schválené interní šarže média. Mikrobiologické testování navíc zajišťuje, že všechny šarže Keratinocyte Growth Medium 2 neobsahují kontaminanty (plísně, bakterie, mykoplazma).

Předpokládané použití primárních lidských epidermálních keratinocytů a růstového média pro keratinocyty

Primární lidské epidermální keratinocyty a růstové médium pro keratinocyty jsou určeny pouze pro in vitro použití, nikoli pro diagnostické nebo terapeutické postupy. Informace o bezpečnosti naleznete v příslušném bezpečnostním listu.

Poznámka: Média PromoCell^® mají nízký nebo nulový obsah séra a nejsou vhodná pro trypsinovou neutralizaci (například při subkultivaci buněk).Doporučujeme použít naši sadu DetachKit (C-41200, C-41210, C-41220), která obsahuje HEPES BSS, trypsin/EDTA a roztok pro neutralizaci trypsinu.