P4850

Proteinasa K from Tritirachium album

buffered aqueous glycerol solution, for molecular biology, ≥800 units/mL

• Sinónimos: Endopeptidasa K
• Número de CAS: 39450-01-6
• Comisión internacional de enzimas: 3.4.21.64 (BRENDA, IUBMB)
• MDL number: MFCD00132129
• UNSPSC Code: 12352204
• NACRES: NA.54

Propiedades

• grade: for molecular biology
• Quality Level: 200
• form: buffered aqueous glycerol solution
• mol wt: 28.93 kDa
• concentration: ≥10 mg/mL; ≥800 units/mL
• impurities: ≤0.5 ppm DNA (PicoGreen^® assay)
• foreign activity: DNase, Nickase and RNase, none detected
• storage temp.: 2-8°C

Descripción

Application

El producto se ha utilizado para estudiar sus efectos previos al tratamiento sobre la fibroína de la seda. Los aspectos analizados en este estudio fueron las propiedades cristalográficas de la hidroxiapatita (HAP) y la microestructura y microdureza de los compuestos. La enzima se ha utilizado también para facilitar el acceso de las sondas a ARNr utilizando técnicas FISH para detectar Staphylococcus aureus patógeno.

La proteinasa K de Tritirachium album se ha utilizado:

• en las células epiteliales endometriales bovinas para la extracción del ADN del virus herpes
• para la extracción del ARN vírico de hisopos nasales
• como un componente del tampón de bloqueo de fase y de lisis directa para PCR

Útil para la inactivación proteolítica de nucleasas durante el aislamiento de ADN y ARN.
Elimina las endotoxinas que se unen a las proteínas catiónicas como la lisozima y la ribonucleasa A.
Se ha comunicado que es útil para el aislamiento de mitocondrias hepáticas, de levadura y de frijol mung
Determinación de la localización de las enzimas en las membranas
Tratamiento de cortes de tejido incluidos en parafina para exponer los sitios de unión de antígenos para el marcado con anticuerpos.
Digestión de proteínas de muestras de tejido cerebral para investigación de los priones en las encefalopatías espongiformes transmisibles (EET).

Biochem/physiol Actions

La proteinasa K tiene una amplia especificidad y degrada muchas proteínas incluso en el estado nativo. Principalmente rompe el enlace peptídico adyacente al grupo carboxilo de aminoácidos alifáticos y aromáticos con grupos α-amino bloqueados. Se ha observado que el peso molecular de la proteinasa K de la secuencia de aminoácidos es de 28 930 Da y la de SDS-PAGE, de 28 500 Da. El pH óptimo oscila entre 7,5 y 9,0 y su punto isoeléctrico es 8,9. Se requiere CA²⁺ (1-5 mM) para su activación. La proteinasa K es inhibida por el DIFP (diisopropilfluorofosfato) o el PMSF (fluoruro de fenilmetilsulfonilo).

La proteinasa K es una serín proteasa estable y muy reactiva. La evidencia procedente de estudios de la estructura cristalina y molecular indica que la enzima pertenece a la familia subtilisina con una tríada catalítica en el sitio activo (ASP³⁹-HIS⁶⁹-ser²²⁴). Es estable en una amplia variedad de entornos: pH, sales amortiguadoras, detergentes (SDS) y temperatura. En presencia de SDS al 0,1 - 0,5 %, la proteinasa K conserva su actividad y digerirá una variedad de proteínas y nucleasas en preparaciones de ADN sin comprometer la integridad del ADN aislado.

Unit Definition

Una unidad hidrolizará la hemoglobina desnaturalizada en urea para producir color equivalente a 1,0 μmol de tirosina por minuto a pH 7,5 y a 37 °C (color por el reactivo Folin-Ciocalteu).

Physical form

Disolución en glicerol al 40 % (v/v) con Tris-HCl 10 mM, pH 7,5, con acetato de calcio 1 mM.

Legal Information

PicoGreen is a registered trademark of Life Technologies

Información de seguridad

• pictograms: GHS08
• signalword: Danger
• hcodes: H334
• pcodes: P261 - P284 - P501
• Hazard Classifications: Resp. Sens. 1
• Storage Class: 10 - Combustible liquids
• wgk_germany: WGK 2
• flash_point_f: Not applicable
• flash_point_c: Not applicable
• ppe: Eyeshields, Faceshields, Gloves, type ABEK (EN14387) respirator filter