Terreno di Eagle modificato da Dulbecco (DMEM)
Tra i terreni definiti per la coltura di cellule e tessuti, il terreno DMEM è quello maggiormente usato per svariati fenotipi cellulari aderenti, quali cellule di mammifero, insetto e vegetali. Il terreno originario di Eagle, sviluppato negli anni ‘50, era stato formulato per coltivare le cellule di pollo. Tuttavia, la modifica introdotta da Dulbecco permise di ottenere una formulazione di supplementazione migliorata, con un contenuto in amminoacidi e vitamine incrementato di quattro volte rispetto al terreno di Eagle originario.
Il terreno DMEM serve per supportare la crescita in coltura di diversi tipi cellulari, comprese le cellule primarie, le cellule staminali e le cellule trasformate. La versione modificata del terreno DMEM è adatta anche ad altre applicazioni sperimentali, come la scoperta di farmaci, l’ingegnerizzazione dei tessuti e lo studio delle vie di trasduzione del segnale.
Il DMEM non è un terreno completo, infatti è privo di nutrienti indispensabili come proteine, lipidi e fattori di crescita. Va quindi supplementato con altri componenti, come il siero fetale bovino (FBS), gli amminoacidi e altri nutrienti per fornire un ambiente di crescita completo e bilanciato alle cellule in coltura.
La nostra selezione comprende una gamma di diverse concentrazioni di glucosio, nonché formulazioni con e senza L-glutammina. Per le applicazioni sensibili agli estrogeni sono disponibili versioni senza l'indicatore di pH rosso fenolo. Inoltre, il nostro listino non comprende solo i formati liquidi, pratici e pronti per l'uso, ma anche le economiche formulazioni in polvere, più facili da conservare e più durature.
DMEM – Alta concentrazione di glucosio vs. bassa concentrazione di glucosio
Il DMEM è disponibile in varie formulazioni, a seconda delle specifiche esigenze delle cellule in coltura e degli obiettivi della ricerca. La formulazione iniziale del terreno prevedeva una bassa concentrazione di glucosio, 1 g/L, adatta alla crescita di cellule sensibili ad alti livelli di glucosio che potrebbero non crescere bene in terreni ricchi di questo zucchero. Il DMEM ad alta concentrazione di glucosio ne contiene 4,5 g/L e si usa solitamente per le cellule che crescono in maniera ottimale in questo tipo di condizioni.
Terreno senza siero (SFM)
Il siero è un componente di molti terreni per colture cellulari e spesso si usa per integrare il terreno con ormoni, fattori di crescita e altre sostanze nutritive necessarie per la crescita e la proliferazione delle cellule. Tuttavia, può contenere impurezze e contaminanti che possono interferire con i risultati degli esperimenti, senza contare che il suo impiego può sollevare obiezioni di tipo etico.
I terreni privi di siero sono formulati senza siero animale né altri componenti di origine animale. Questi terreni sono basati su formulazioni nutrizionali e ormonali adatte a supportare la crescita e la proliferazione delle cellule in coltura.
Tra i vantaggi dei terreni senza siero per le colture cellulari vi sono una produttività superiore, la maggiore replicabilità e la semplificazione del processo di purificazione e di quello downstream. Per alcuni tipi di cellule e per determinati obiettivi sperimentali, i terreni privi di siero possono poi essere formulati con combinazioni specifiche di fattori di crescita. Questi terreni sono adatti per svariate applicazioni con le colture cellulari, quali la produzione di proteine ricombinanti, lo studio della crescita e della differenziazione cellulare, l’analisi delle vie di trasduzione del segnale, la produzione di vaccini virali, oltre alla scoperta e allo sviluppo di nuovi farmaci.
Il DMEM con Ham’s F-12 è un esempio di terreno senza siero che si usa per la crescita di cellule di mammifero, come le cellule MDCK, le cellule gliali, i fibroblasti, le cellule endoteliali umane e i fibroblasti di ratto. Il DMEM contiene concentrazioni elevate di amminoacidi, glucosio e vitamine, mentre l’Ham’s F12 fornisce zinco, putrescina, ipoxantina e timidina. Per compensare la perdita di potere tamponante, si possono aggiungere tamponi come PBS o HEPES.
DMEM con e senza rosso fenolo
Il rosso fenolo è un indicatore che cambia colore a seconda del valore di pH ed è presente nel terreno DMEM a una concentrazione dello 0,01-0,03%. Serve per monitorare il pH del terreno e garantire che non vi siano variazioni rispetto all’intervallo adatto alla crescita e al metabolismo delle cellule.
Tuttavia, alcune cellule possono risultare sensibili al rosso fenolo oppure possono essere influenzate dalla sua presenza nel terreno, per questo è disponibile anche la versione di DMEM senza rosso fenolo. Per alcune applicazioni downstream, come l’analisi delle proteine o quella dell’espressione genica, la presenza di rosso fenolo nel terreno potrebbe essere un fattore interferente. Anche per alcune tecniche di analisi delle immagini, come la microscopia in fluorescenza, può essere necessario ricorrere al DMEM senza rosso fenolo per ottenere risultati accurati. Il rosso fenolo assorbe la luce nello spettro visibile e perciò può interferire con l’accuratezza di tali tecniche. La scelta tra DMEM con e senza rosso fenolo dipende dalle specifiche esigenze e requisiti delle cellule in coltura e dagli obiettivi della ricerca.
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