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07-354

Sigma-Aldrich

Anticorpo anti-acetil-istone H3 (Lys18)

serum, Upstate®

Sinonimo/i:

H3K18Ac, Histone H3 (acetyl K18)

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About This Item

Codice UNSPSC:
12352203
eCl@ss:
32160702
NACRES:
NA.41

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Origine biologica

rabbit

Livello qualitativo

Forma dell’anticorpo

serum

Tipo di anticorpo

primary antibodies

Clone

polyclonal

Reattività contro le specie

yeast, Saccharomyces cerevisiae, human

Reattività contro le specie (prevista in base all’omologia)

vertebrates (most common)

Produttore/marchio commerciale

Upstate®

tecniche

ChIP: suitable (ChIP-seq)
dot blot: suitable
western blot: suitable

N° accesso NCBI

N° accesso UniProt

Condizioni di spedizione

dry ice

modifica post-traduzionali bersaglio

acetylation (Lys18)

Informazioni sul gene

human ... H3C1(8350)

Descrizione generale

L′istone H3 è una delle cinque principali proteine istoniche che costituiscono la struttura della cromatina nelle cellule eucariotiche. Caratterizzato da un dominio globulare principale e da una lunga coda N terminale, H3 è coinvolto nella struttura dei nucleosomi che si organizzano nella classica struttura a ′collana di perle′.



L′acetilazione dell′istone H3 ha luogo a livello di numerose lisine situate in varie posizioni della coda istonica ed è effettuata da una famiglia di enzimi noti come istone-acetiltransferasi (HAT).

Specificità

Riconosce l′istone H3 acetilato sulla lisina 18.

Immunogeno

Peptide sintetico (GKAPRAcKQLASK-C), coniugato con KLH, corrispondente agli amminoacidi 13-23 dell'istone H3 di lievito acetilato sulla lisina 18, con l'aggiunta di una cisteina C-terminale per favorire la coniugazione

Applicazioni

Immunoprecipitazione della cromatina:
dati ottenuti con un lotto rappresentativo.
La cromatina sonicata preparata da cellule HeLa (equivalenti a 1 X 10E6 cellule/IP) è stata immunoprecipitata usando 2 µL di siero di coniglio normale o 2 µL di anti-acetil-istone H3 (Lys18) e il kit Magna ChIP A (N° Cat. 17-610). La riuscita dell′immunoprecipitazione dell'acetil-istone H3 (Lys18)è stata confermata mediante qPCR utilizzando primer di controllo specifici per la regione del promotore del gene GADPH umano come locus positivo e i primer della β-globina come locus negativo. I dati sono presentati come input percentuale di ciascun campione IP rispetto all′input di cromatina per ciascun amplicone e campione CHIP come indicato.
Per la descrizione dell'esperimento, consultare il protocollo del kit EZ-Magna ChIP A (N° Cat. 17-408) o EZ-ChIP (N° Cat. 17-371).

ChIP-sequenziamento:
Dati ottenuti da un lotto rappresentativo. L′immunoprecipitazione della cromatina è stata ottenuta con il kit Magna ChIP HiSens (N° Cat. 17-10460), 2 μg di anticorpo anti-acetil-istone H3 (Lys18) (N° Cat. 07-354), 20 µL di sferette con Proteina A/G e cromatina trattata con formaldeide (crosslinked) ottenuta da 1e6 cellule HeLa, seguita da purificazione del DNA su sferette magnetiche. Le librerie sono state preparate da campioni di DNA input e ChIP usando protocolli standard con adattatori Illumina contrassegnati da codici a barre e analizzati nello strumento Illumina HiSeq. Gli oltre 10 milioni di letture contenute nei file FastQ del sequenziatore sono stati mappati usando il sistema di allineamento Bowtie (http://bowtie-bio.sourceforge.net/manual.shtml) dopo rimozione dei tag con TagDust (http://genome.gsc.riken.jp/osc/english/dataresource/). I picchi sono stati identificati usando MACS (http://luelab.dfci.harvard.edu/MACS/) e i picchi e i reads sono stati visualizzati sotto forma di track personalizzata sul Genome Browser dell′UCSC (http://genome.ucsc.edu) da file nei formati BigWig e BED.

Analisi di Western blotting:
Dati ottenuti con un lotto rappresentativo.
L'istone H3 ricombinante (corsia 1, N° Cat. 14-494) e proteine estratte con acido di cellule HeLa (N° Cat. 17-305) trattate (corsia 2) e non trattate (corsia 3) con butirrato di sodio sono stati esposti all'anticorpo anti-acetil-istone H3 (Lys18) (diluizione 1:10.000).
La freccia indica l'acetil-istone H3 (Lys18) (17 kDa).

Dot blot:
Dati ottenuti con un lotto rappresentativo.
Quantità pari a 40 ng e 4 ng di peptidi istonici con varie modificazioni (vedere tabella 1) sono state trasferite su una membrana di PVDF ed esposte all'anticorpo anti-acetil-istone H3 (Lys18) (diluizione 1:5.000). Le proteine sono state visualizzate mediante un anticorpo di capra anti-IgG di coniglio coniugato con HRP e un sistema di rivelazione per chemiluminescenza. L'immagine è stata ottenuta con 60 secondi di esposizione.
L′anticorpo anti-acetil-istone H3 (Lys18) (anticorpo policlonale di coniglio) è convalidato per l′uso nei saggi di ChIP e WB per la rivelazione dell'acetil-istone H3 (Lys18), noto anche come H3K18Ac, istone H3 (acetil K18).

Qualità

Valutata di routine mediante immunoblotting su proteine estratte con acido di cellule HeLa trattate con butirrato di sodio

Descrizione del bersaglio

17 kDa

Linkage

Sostituisce: 04-1107

Stato fisico

100 μL di siero di coniglio contenente azoturo di sodio 0,05% e glicerolo 30%.

Altre note

Concentrazione: per la concentrazione specifica del lotto, fare riferimento al Certificato di Analisi.

Note legali

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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Codice della classe di stoccaggio

12 - Non Combustible Liquids

Classe di pericolosità dell'acqua (WGK)

WGK 1

Punto d’infiammabilità (°F)

Not applicable

Punto d’infiammabilità (°C)

Not applicable


Certificati d'analisi (COA)

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