Protokoll Gelatinebeschichtung für die Zellkultur

Gelatine ist ein molekulares Kollagenderivat und wird durch alkalischen Aufschluss von Kollagen aus Rinderhaut synthetisiert. Gelatine ist ein Hydrokolloid und reich an Glycin, Prolin und Hydroxyprolin, die für die strukturelle Stabilität sorgen. Gelatine ist ein ideales Zellanhaftungssubstrat für die Zellkultur. Die optimale Konzentration hängt vom Zelltyp und vom Forschungsziel ab.

Wichtige Hinweise vor der Gelatinebeschichtung

• Stellen Sie sicher, dass die Zellen gesund und in ausreichender Zahl vorhanden sind.
• Gelatinelösungen müssen sich vor dem Beschichten bei 37 °C vollständig verflüssigen.
• Gelatinelösungen können bei 4–8 °C auf unbestimmte Zeit gelagert werden; höhere Temperaturen führen zu Hydrolyse und Integritätsverlust.
• Die typische Oberflächenabdeckungskonzentration beträgt 100–200 µg/ cm². Die Konzentration der Oberflächenabdeckung kann abhängig von den zu kultivierenden Zellen unterschiedlich sein. Die optimalen Anhaftungsbedingungen müssen für jede Zelllinie und jede Anwendung bestimmt werden.
• Nach der Beschichtung nicht zu stark trocknen, da dadurch die Struktur der Gelatine gestört und die Zellanhaftung beeinträchtigt wird.

Protokoll Gelatinebeschichtung für die Zellkultur

1. Eine 2 % (w/v) Lösung vorbereiten, indem Gelatine in Wasser in Gewebekulturqualität aufgelöst wird.
2. Durch Autoklavieren bei 121 °C, 15 psi 30 Minuten sterilisieren.
3. Die Kulturoberfläche mit 5-10 µl Gelatinelösung /cm² (d.h. 100-200 µg/cm²) beschichten.
4. Vor dem Einbringen von Zellen und Medium mindestens 2 Stunden trocknen lassen.
5. Alternativ kann auch eine Gelatinelösung (Produkt-Nr. G1393) verwendet werden, um die Kulturgefäße direkt zu beschichten.

Tabelle 1. Gelatine für die Zellanhaftung.

Produkt-Nr.	Beschreibung	Beschichtungskonzentration	Lösen in
G1393	Gelatinelösung	100–200 μg/cm2	Steriles Wasser
G9136	Gelatine aus Schweinehaut	100–200 μg/cm2	Warmes Basalmedium (ohne Serum)
G1890	Gelatine aus Schweinehaut	100–200 μg/cm2	Warmes Wasser
G7041	Gelatine aus Haut von Kaltwasserfischen	100–200 μg/cm2
G9391	Gelatine aus Rinderhaut	100–200 μg/cm2

Häufig gestellte Fragen zur Beschichtung von Kulturen mit Gelatine

• Wie hoch ist der Reinheitsgrad von Gelatineprodukten?
  Wir bestimmen die Reinheit von Fibronectinlösungen nicht. Alle unsere Fibronectinpulver sind zu 70-90 % rein.
  
  
• Welches Lösungsmittel ist am besten für die Verdünnung von Gelatinepulvern geeignet?
  Die Lösungsmittel, die für die Verdünnung von Gelatinen geeignet sind, sind in Tabelle 1 aufgeführt.
  
  
• Wie lange kann Gelatine aufbewahrt werden?
  Gelatinelösungen können unbegrenzt bei 2–8 °C gelagert werden. Mit Gelatine beschichtete Platten können bei 2–8 °C bis zu 4 Wochen aufbewahrt werden, sofern sie gut verschlossen sind, um eine Kontamination und/oder ein Austrocknen der Gelatine zu verhindern. Das Produkt nicht verwenden, wenn Verfärbungen oder Risse auf der Oberfläche des beschichteten Materials auftreten.
  
  
• Welche Bedeutung hat die Bloom-Zahl für Gelatine?
  Die Bloomzahl wurde von Oscar T. Bloom eingeführt und gibt die Steifigkeit eines Gelatinefilms an. Sie wurde erstmals mit einem Bloom-Gelometer in einem kontrollierten Verfahren zur Messung der Steifigkeit eines Gelatinefilms gemessen. Eine höhere Zahl bedeutet ein steiferes Produkt. Die Bloomzahl/Bloomstärke unterstützt bei der Auswahl des richtigen Gelatineprodukts für Ihre Anwendungen.