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  • Evaluation of the sensitivity, responsiveness and reproducibility of primary rainbow trout hepatocyte vitellogenin expression as a screening assay for estrogen mimics.

Evaluation of the sensitivity, responsiveness and reproducibility of primary rainbow trout hepatocyte vitellogenin expression as a screening assay for estrogen mimics.

Aquatic toxicology (Amsterdam, Netherlands) (2015-01-07)
Maria T Hultman, Jan Thomas Rundberget, Knut Erik Tollefsen
ZUSAMMENFASSUNG

Vitellogenin (Vtg) induction in primary fish hepatocytes has been proposed as an in vitro screening assay for ER agonists and antagonists, but has not yet been used extensively as a high-throughput screening tool due to poor reproducibility, sensitivity and overall feasibility. The present work has evaluated the role of seasonal variation, normalization, optimal culture and assay conditions on the sensitivity, responsiveness and reproducibility of in vitro vtg gene mRNA and protein expression in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) primary hepatocytes using the xenoestrogen 17α-ethynylestradiol (EE2) as a test chemical. The results show that primary hepatocytes display a relatively high individual and seasonal variation in both Vtg mRNA and protein induction potential, although less variance was observed in assay sensitivity. Data normalization of assay response to maximum (3 nM EE2) and minimum (DMSO) Vtg production dramatically reduced this variance and led to improved assay reproducibility. A time-dependent response was observed both for mRNA and protein expression, reaching maximum Vtg induction after 96 h of exposure, although reproducible concentration response curves for both Vtg mRNA and protein could be obtained already after 48 h. A need for chemical re-exposure of the hepatocytes was identified to be important for sustaining exposure concentrations in extended studies (>48 h), whereas different plate formats (96, 24 or 6 wells) did not affect the bioassay performance. In conclusion, standardization of hepatocyte bioassay and test conditions as well as data-normalization procedures are proposed to be instrumental for more consistent and comparable results in future use of this in vitro assay.

MATERIALIEN
Produktnummer
Marke
Produktbeschreibung

Sigma-Aldrich
Methanol, suitable for HPLC, ≥99.9%
Preise und Verfügbarkeit sind derzeit nicht verfügbar.
Sigma-Aldrich
Aceton, ACS reagent, ≥99.5%
Preise und Verfügbarkeit sind derzeit nicht verfügbar.
Sigma-Aldrich
Methanol, ACS reagent, ≥99.8%
Preise und Verfügbarkeit sind derzeit nicht verfügbar.
Sigma-Aldrich
Aceton, suitable for HPLC, ≥99.9%
Preise und Verfügbarkeit sind derzeit nicht verfügbar.
Sigma-Aldrich
Methanol, suitable for HPLC, gradient grade, ≥99.9%
Preise und Verfügbarkeit sind derzeit nicht verfügbar.
Sigma-Aldrich
Aceton, HPLC Plus, for HPLC, GC, and residue analysis, ≥99.9%
Preise und Verfügbarkeit sind derzeit nicht verfügbar.
Sigma-Aldrich
Toluol, ACS reagent, ≥99.5%
Preise und Verfügbarkeit sind derzeit nicht verfügbar.
Sigma-Aldrich
Natriumbicarbonat, ACS reagent, ≥99.7%
Preise und Verfügbarkeit sind derzeit nicht verfügbar.
Sigma-Aldrich
Methanol, HPLC Plus, ≥99.9%
Preise und Verfügbarkeit sind derzeit nicht verfügbar.
Sigma-Aldrich
Natriumcarbonat, powder, ≥99.5%, ACS reagent
Preise und Verfügbarkeit sind derzeit nicht verfügbar.
Sigma-Aldrich
Toluol, suitable for HPLC, 99.9%
Preise und Verfügbarkeit sind derzeit nicht verfügbar.
Sigma-Aldrich
Toluol, HPLC Plus, for HPLC, GC, and residue analysis, ≥99.9%
Preise und Verfügbarkeit sind derzeit nicht verfügbar.
Sigma-Aldrich
Natriumbicarbonat, powder, BioReagent, for molecular biology, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture
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Sigma-Aldrich
Aceton, Laboratory Reagent, ≥99.5%
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Sigma-Aldrich
Ammoniumacetat, ACS reagent, ≥97%
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Sigma-Aldrich
Natriumcarbonat, ACS reagent, anhydrous, ≥99.5%, powder or granules
Preise und Verfügbarkeit sind derzeit nicht verfügbar.
Sigma-Aldrich
Natriumbicarbonat, ReagentPlus®, ≥99.5%, powder
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Sigma-Aldrich
Ammoniumacetat, ≥99.99% trace metals basis
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Sigma-Aldrich
Kupfer(II)-sulfat, ReagentPlus®, ≥99%
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Sigma-Aldrich
Methanol, suitable for HPLC, gradient grade, suitable as ACS-grade LC reagent, ≥99.9%
Preise und Verfügbarkeit sind derzeit nicht verfügbar.
Sigma-Aldrich
Methanol, puriss. p.a., ACS reagent, reag. ISO, reag. Ph. Eur., ≥99.8% (GC)
Preise und Verfügbarkeit sind derzeit nicht verfügbar.
Sigma-Aldrich
Toluol, puriss. p.a., ACS reagent, reag. ISO, reag. Ph. Eur., ≥99.7% (GC)
Preise und Verfügbarkeit sind derzeit nicht verfügbar.
Sigma-Aldrich
Aceton, puriss. p.a., ACS reagent, reag. ISO, reag. Ph. Eur., ≥99.5% (GC)
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Sigma-Aldrich
Natriumcarbonat, ACS reagent (primary standard), anhydrous, 99.95-100.05% dry basis
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Sigma-Aldrich
Methanol, Laboratory Reagent, ≥99.6%
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Sigma-Aldrich
5-Dimethylamino-1-naphthalinsulfonylchlorid, BioReagent, suitable for amino acid labeling, powder and chunks, ≥99% (HPLC)
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Sigma-Aldrich
Natriumbicarbonat, anhydrous, free-flowing, Redi-Dri, ACS reagent, ≥99.7%
Preise und Verfügbarkeit sind derzeit nicht verfügbar.
Sigma-Aldrich
Natriumcarbonat, ReagentPlus®, ≥99.5%
Preise und Verfügbarkeit sind derzeit nicht verfügbar.
Sigma-Aldrich
Aceton, suitable for HPLC, ≥99.8%
Preise und Verfügbarkeit sind derzeit nicht verfügbar.
Sigma-Aldrich
Ammoniumacetat, for molecular biology, ≥98%
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