12156792910
Roche
Kit de détection in situ de la mort cellulaire, rouge TMR
sufficient for ≤50 tests
Synonyme(s) :
rouge tm, kit de détection in situ de la mort cellulaire, rouge, tm, kit de détection in situ de la mort cellulaire
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About This Item
Code UNSPSC :
12352200
Produits recommandés
Utilisation
sufficient for ≤50 tests
Niveau de qualité
Fabricant/nom de marque
Roche
Technique(s)
flow cytometry: suitable
Température de stockage
−20°C
Catégories apparentées
Description générale
Kit for the detection and quantification of apoptotic cell death on a single-cell level by flow cytometry and fluorescence microscopy, and for double labeling with fluorescein-labeled cell markers (TMR red).
Les méthodes largement utilisées pour déterminer l'apoptose incluent l'analyse de l'ADN génomique par électrophorèse sur gel d'agarose et les essais de fragmentation d'ADN à base de 3H-thymidine et alternativement de 5-Bromo-2'-désoxyuridine. Ces méthodes impliquent la séparation d'ADN de faible poids moléculaire fragmenté de l'ADN de poids moléculaire élevé non fragmenté dans une population de cellules donnée. De ce fait, ces méthodes ne fournissent pas d'information sur le devenir d'une cellule individuelle dans une population de cellules donnée, et en particulier, dans les coupes de tissus. Alternativement, des cellules apoptotiques individuelles peuvent être reconnues au microscope en raison de l'apparence caractéristique de la condensation et de la fragmentation de la chromatine nucléaire, mais cette méthode est subjective et limitée à un intervalle de temps relativement réduit quand les changements morphologiques sont au maximum.
Le signe distinctif de l'apoptose est la dégradation de l'ADN, qui, aux premiers stades, est sélective vis-à-vis des régions de liaison de l'ADN internucléosomal. Le clivage de l'ADN peut produire des coupures (brèches) de l'ADN double brin et de l'ADN simple brin. Les deux types de coupures peuvent être détectés par le marquage des terminaisons 3'-OH libres avec des nucléotides modifiés (par ex. biotine-dUTP, DIG-dUTP, fluorescéine-dUTP) dans une réaction enzymatique. La désoxyribonucléotidyl-transférase terminale (TdT) catalyse la polymérisation indépendante de la matrice des désoxyribonucléotides à l'extrémité 3' de l'ADN simple brin et double brin. Cette méthode est également appelée TUNEL (TdT-mediated dUTP-X Nick End Labeling). Il est également possible de marquer les groupes 3'-OH à l'aide d'ADN polymérases par le mécanisme dépendant de la matrice appelé translation de coupure (nick translation). Toutefois, la méthode TUNEL est considérée comme plus sensible et plus rapide.
Échantillons : Cellules en suspension, préparation de frottis de cellules centrifugées sur un appareil Cytospin et de frottis cellulaires, cellules adhérentes cultivées sur des lames, coupes de tissus congelées et en paraffine.
Principe
Le Kit de détection in situ de la mort cellulaire, rouge TMR s'appuie sur la détection de cassures de l'ADN simple et double brin qui se produisent aux premiers stades de l'apoptose.
Les cellules apoptotiques sont fixées et perméabilisées. Elles sont ensuite incubées avec le mélange réactionnel TUNEL qui contient de la TdT et du TMR-dUTP. Au cours de cette période d'incubation, la TdT catalyse l'ajout du TMR-dUTP aux groupes 3′-OH libres dans l'ADN simple brin et double brin. Après lavage, le marqueur incorporé au niveau des sites endommagés de l'ADN est visualisé par cytométrie en flux et/ou microscopie en fluorescence.
Le signe distinctif de l'apoptose est la dégradation de l'ADN, qui, aux premiers stades, est sélective vis-à-vis des régions de liaison de l'ADN internucléosomal. Le clivage de l'ADN peut produire des coupures (brèches) de l'ADN double brin et de l'ADN simple brin. Les deux types de coupures peuvent être détectés par le marquage des terminaisons 3'-OH libres avec des nucléotides modifiés (par ex. biotine-dUTP, DIG-dUTP, fluorescéine-dUTP) dans une réaction enzymatique. La désoxyribonucléotidyl-transférase terminale (TdT) catalyse la polymérisation indépendante de la matrice des désoxyribonucléotides à l'extrémité 3' de l'ADN simple brin et double brin. Cette méthode est également appelée TUNEL (TdT-mediated dUTP-X Nick End Labeling). Il est également possible de marquer les groupes 3'-OH à l'aide d'ADN polymérases par le mécanisme dépendant de la matrice appelé translation de coupure (nick translation). Toutefois, la méthode TUNEL est considérée comme plus sensible et plus rapide.
Échantillons : Cellules en suspension, préparation de frottis de cellules centrifugées sur un appareil Cytospin et de frottis cellulaires, cellules adhérentes cultivées sur des lames, coupes de tissus congelées et en paraffine.
Principe
Le Kit de détection in situ de la mort cellulaire, rouge TMR s'appuie sur la détection de cassures de l'ADN simple et double brin qui se produisent aux premiers stades de l'apoptose.
Les cellules apoptotiques sont fixées et perméabilisées. Elles sont ensuite incubées avec le mélange réactionnel TUNEL qui contient de la TdT et du TMR-dUTP. Au cours de cette période d'incubation, la TdT catalyse l'ajout du TMR-dUTP aux groupes 3′-OH libres dans l'ADN simple brin et double brin. Après lavage, le marqueur incorporé au niveau des sites endommagés de l'ADN est visualisé par cytométrie en flux et/ou microscopie en fluorescence.
Spécificité
La réaction TUNEL marque de préférence les cassures du brin d'ADN générées pendant l'apoptose. Cela permet de faire la distinction entre l'apoptose issue d'une nécrose et celle issue des cassures du brin d'ADN induites par les médicaments cytostatiques et l'irradiation.
Application
It has been used in apoptosis detection assay.
Precise, fast, and simple technique for detecting and quantitating apoptotic DNA fragmentation at the single-cell level in cells and tissues with a red fluorescent label for fluorescence microscopy and flow cytometry.
Conditionnement
1 kit constitué de 2 éléments.
Notes préparatoires
Concentration de travail :
μ
μμμ
The TUNEL reaction mixture should be prepared immediately before use and should not be stored. Keep TUNEL reaction mixture on ice until use.
μ
μμμ
The TUNEL reaction mixture should be prepared immediately before use and should not be stored. Keep TUNEL reaction mixture on ice until use.
The TUNEL reaction mixture is prepared by mixing the Enzyme Solution and the Label Solution prior to use.
Composants de kit seuls
Réf. du produit
Description
- Enzyme Solution (TdT)
- Label Solution (TMR-dUTP)
Mention d'avertissement
Danger
Mentions de danger
Conseils de prudence
Classification des risques
Aquatic Chronic 2 - Carc. 1B Inhalation
Code de la classe de stockage
6.1D - Non-combustible acute toxic Cat.3 / toxic hazardous materials or hazardous materials causing chronic effects
Classe de danger pour l'eau (WGK)
WGK 3
Point d'éclair (°F)
does not flash
Point d'éclair (°C)
does not flash
Certificats d'analyse (COA)
Recherchez un Certificats d'analyse (COA) en saisissant le numéro de lot du produit. Les numéros de lot figurent sur l'étiquette du produit après les mots "Lot" ou "Batch".
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