Chromatographie liquide basse pression (LPLC)

La LPLC est une technique hautement sélective destinée principalement à l'étude des biomolécules comme les protéines, les peptides et les anticorps monoclonaux. C'est avant tout une technique préparative non destructive, ce qui en fait le choix idéal pour la séparation de biomolécules et la purification de protéines marquées recombinantes. La LPLC sert aussi à purifier les principes actifs pharmaceutiques, à éliminer les pesticides des échantillons et à purifier les petites molécules.

Instrumentation de LPLC

Un système de LPLC comporte une colonne, une pompe basse pression (souvent péristaltique), un injecteur, un détecteur et un collecteur de fractions. La pompe péristaltique à rouleaux, de conception simple, aspire à débit fixe la phase mobile contenue dans le réservoir et la transfère dans la colonne.

Le solvant (phase mobile) passe ensuite dans un injecteur contenant l'échantillon afin d'introduire l'échantillon dans la colonne en vue de sa séparation. Les constituants de l'échantillon sont séparés en fonction de leurs différentes vitesses de progression dans la colonne jusqu'au détecteur. Un détecteur UV-Vis ou d'indice de réfraction (IR) en ligne surveille l'effluent en sortie de colonne, permettant aux échantillons d'être recueillis par un collecteur de fractions. Les échantillons collectés sont classés en fonction de leur temps d'élution.

Adsorbants et matériel de LPLC

Le matériau servant de matrice à la colonne doit présenter une bonne stabilité mécanique et chimique, contenir des groupements fonctionnels facilitant la fixation des analytes et être inerte. La structure de la colonne est généralement constituée de verre ou de matières plastiques inertes, en fonction du solvant utilisé.