Milieu de Eagle modifié par Dulbecco F12 (DMEM F12)

Ces dernières années, les chercheurs ont réussi à cultiver diverses lignées cellulaires dans des milieux sans sérum qui contiennent un supplément en nutriments, en facteurs de croissance et en hormones à la place du sérum. Mather et Sato (BBRC, 1985) sont parvenus à cultiver avec succès des cellules de Leydig et de Sertoli dans un milieu sans sérum qui contenait de l'insuline, de la transferrine, du facteur de croissance épidermique, de l'hormone lutéinisante ou de l'hormone folliculo-stimulante, de la somatomédine et de l'hormone de croissance. 

Même si les hormones et leurs concentrations sont spécifiques au type de cellule étudié, les résultats ont montré que le milieu idéal pour ces études était un mélange 1/1 entre le milieu de Eagle modifié par Dulbecco (DMEM) et le mélange de nutriments F-12 de Ham. Ce mélange connu sous le nom de milieu DMEM/F12 contient notamment 21 acides aminés, 10 vitamines, du glucose, du fer et du zinc. 

Le DMEM/F12 est un milieu plus riche et plus complexe que le DMEM. Du tampon HEPES peut également être inclus dans la formulation à une concentration finale de 15 mM pour compenser la perte de capacité tampon liée à la suppression du sérum. Ce milieu de synthèse ne contient ni sérum, ni protéines, ni lipides, ni facteurs de croissance et peut donc nécessiter une supplémentation en sérum de veau fœtal (FBS) selon le type de culture cellulaire. Certaines formulations commerciales peuvent inclure ou non de la glutamine ou du rouge de phénol.

• Applications du milieu DMEM/F12

Applications du milieu DMEM/F12

Le milieu basal avancé DMEM/F12 est souvent utilisé dans des applications qui nécessitent des milieux à faible teneur en sérum ou sans sérum, comme la culture d'organoïdes en 3D ou la culture de cellules souches. Le milieu DMEM/F12 peut également être utilisé pour optimiser les transfections cellulaires qui nécessitent des conditions à faible teneur en sérum ou sans sérum.

En plus de la culture de cellules souches, qui nécessite souvent un environnement à teneur réduite en sérum ou sans sérum, les cellules primaires peuvent être cultivées dans un milieu DMEM/F12. Il s'agit notamment des fibroblastes, des cellules MDCK, des lignées de cellules neuronales, des cellules gliales et des cellules musculaires lisses, qui présentent une croissance et une fonction équivalentes ou supérieures à celles des cellules primaires ayant été supplémentées avec de fortes concentrations de sérum. Les cellules cultivées avec le milieu DMEM/F12 présentent également la même morphologie cellulaire que les cellules cultivées dans des conditions à haute teneur en sérum.