Préparation des milieux
La préparation des milieux de culture cellulaire a des répercussions majeures sur la croissance des cellules de mammifère et sur les résultats expérimentaux. De même, il existe des milieux spécifiques, formulés pour favoriser la culture de micro-organismes in vitro. Les milieux de culture fournissent une source d'énergie pour la croissance cellulaire et des composés qui régulent les processus cellulaires. Les cultures de cellules procaryotes et eucaryotes peuvent avoir des besoins spécifiques pour leur croissance. La sélection des milieux de culture dépend du type de culture, de l'objectif de la mise en culture et des exigences en matière de densité cellulaire.
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Préparation des milieux
Les milieux de culture disponibles dans le commerce sont fournis sous forme déshydratée ou de poudre, de concentrat liquide ou en tant que solutions prêtes à l'emploi. Les milieux déshydratés pour les cultures de bouillon doivent être préparés en les dissolvant dans de l'eau distillée et en ajustant le pH final avant stérilisation. Les milieux en poudre pour les cultures sur gélose doivent être dissous dans de l'eau distillée, mélangés, puis bouillis ou autoclavés avant d'être versés dans des boîtes de Pétri stériles en employant des techniques aseptiques. Les milieux de culture fournis sous forme de concentrats liquides doivent être dilués de façon aseptique dans de l'eau distillée, leur pH doit être ajusté, puis ils doivent être répartis dans des récipients stériles pour le stockage. Les milieux de culture fournis en tant que solutions de travail sont prêts à l'emploi après ajout du sérum ou de tout autre supplément requis dans le cadre d'une filtration stérilisante et/ou de conditions aseptiques et après chauffage à la température appropriée pour la croissance cellulaire.
Stérilisation des milieux de culture
Les milieux de culture préparés à partir de poudres doivent être stérilisés par filtration, chauffés ou autoclavés avant utilisation. Bien que les milieux liquides soient souvent fournis stériles et à une concentration prête à l'emploi, une filtration stérilisante est recommandée, particulièrement si des sérums ou d'autres suppléments doivent être ajoutés avant utilisation. Après stérilisation, il convient d'employer des techniques aseptiques lors de la manipulation de ces milieux de culture pour prévenir toute contamination croisée ou croissance de micro-organismes indésirables.
Suppléments pour milieux de culture
Certains suppléments requis pour la culture ou la régulation cellulaire sont instables ou sensibles à la chaleur ; par conséquent, ils doivent être ajoutés par l'utilisateur au milieu de culture basal stérilisé à la chaleur avant utilisation. Le sérum, typiquement dérivé de sources bovines (FBS), est un supplément communément utilisé dans les milieux de culture de cellules animales. Des hormones, des facteurs de croissance et des molécules de signalisation spécifiques peuvent être requis pour faire croître certains types de cellules. Des suppléments, tels que l'IPTG, sont utilisés pour induire une expression protéique. Des antibiotiques peuvent également être ajoutés aux milieux de culture pour contrôler la croissance de contaminants fongiques et bactériens, bien que la contamination puisse être bien contrôlée avec une manipulation et un stockage appropriés des milieux.
Stockage et utilisation des milieux de culture
Les milieux de culture préparés et disponibles dans le commerce sous une forme liquide, de gélose pré-coulée ou de solutions prêtes à l'emploi sont typiquement stockés à 4 °C, dans l'obscurité, pour supprimer la croissance des micro-organismes opportunistes et éviter toute dégradation des composants des milieux de culture induite par la lumière. Avant inoculation des cultures, les milieux doivent être chauffés à la température appropriée pour la croissance cellulaire.
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