For column chromatography, no more than 20 mM is suggested in the extract, equilibration, and wash buffers to prevent non-specific binding of proteins. No more than 250 mM is suggested for the elution buffers. Many proteins will elute with imidazole levels as low as 100 to 200 mM. For batch methods the imidazole concentration may have to be reduced or eliminated.When a protein is expressed at low levels, the presence of the imidazole limits the binding of the protein in the batch method but not when used in a column.
P6611
Gel d′affinité au nickel HIS-Select®
HIS-Select® Nickel Affinity Gel
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(1:1 suspension in a 20% ethanol solution)
Synonyme(s) :
Ni-NTA resin, nickel charged agarose
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5 ML
203,00 $
25 ML
608,00 $
100 ML
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About This Item
Code UNSPSC :
12352200
Nomenclature NACRES :
NA.56
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Produits recommandés
Conjugué
magnetic beads
Niveau de qualité
Forme
(1:1 suspension in a 20% ethanol solution)
Caractéristiques
hydrophilic
Conditionnement
pkg of 1 mL
pkg of 100 mL
pkg of 25 mL
pkg of 5 mL
pkg of 500 mL
Concentration
1.5-2.4 mL/mL (suspension in packed gel)
Technique(s)
protein purification: suitable
Couleur
faint blue to very dark blue
Matrice
6% Beaded Agarose
Capacité
>15 mg/mL, gel binding capacity (protein)(with an approx. 30 kDa protein)
Température de transition
flash point 32 °C (closed cup)
Température de stockage
2-8°C
Description générale
Le gel d'affinité au nickel HIS-Select® est un produit durable qui est capable de capturer les protéines recombinantes portant une étiquette histidine à haut débit. Les protéines recombinantes portant une étiquette histidine sont fixées en conditions natives ou dénaturantes.
Le gel d'affinité au nickel HIS-Select® est un produit pour chromatographie d'affinité sur ions métalliques immobilisés (IMAC) qui est utilisé pour la purification de protéines à étiquette His. S'il est vrai que la liaison hydrophile non chargée unique du groupement chélate de l'acide nitrilotriacétique (NTA) quadridenté breveté sur l'agarose perlé chargé en nickel garantit une forte sélectivité pour la purification des protéines à étiquette His à petite ou moyenne échelle, elle réduit également l'adhésion non spécifique des autres protéines. Le gel d'affinité au nickel HIS-Select est sélectif pour les protéines recombinantes à étiquette His tout en présentant une faible fixation non spécifique des autres protéines. La sélectivité peut être modulée par l'inclusion d'imidazole pendant la chromatographie.
Application
Le gel d'affinité au nickel HIS-Select® a été utilisé dans la purification de protéines recombinantes comme la protéine de liaison au calcium à motifs "main EF" (ou "EF-hand" en anglais) (S100A14)[1], la protéine alpha du facteur de transcription à homéodomaine LIM 1[2], le récepteur sigma-1[3] ainsi qu'une boucle en épingle à cheveux[4], la protéine stable 1 (SP1)[5][6] et la protéine de fusion BCR/ABL.[7]
Caractéristiques et avantages
- Grande sélectivité, pour une plus grande pureté
- Liaison hydrophile non chargée inédite qui réduit l'adhésion non spécifique
- Capacité de fixation supérieure à 15 mg/ml pour les protéines marquées à l'histidine
- Fixation en conditions dénaturantes ou non dénaturantes
- Purification en une seule étape
- Interactions ioniques indésirables réduites au minimum
- Très faible élution du nickel
- Taille des billes : 45 à 165 μm
Liaison
Ce produit est également disponible avec la technologie EZview™ (référence E3528).
Forme physique
Suspension 1:1 dans une solution d′éthanol à 20 %
Stockage et stabilité
Le gel d'affinité au nickel HIS-Select reste stable pendant au moins un an lorsqu'il est conservé dans de bonnes conditions. Il est recommandé de nettoyer le gel d'affinité au nickel HIS-Select après chaque utilisation et d'ajouter un agent antimicrobien tel que de l'éthanol à 20 % dans le tampon de conservation.
Informations légales
HIS-Select is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Produit(s) apparenté(s)
Réf. du produit
Description
Tarif
Mention d'avertissement
Warning
Mentions de danger
Conseils de prudence
Classification des risques
Flam. Liq. 3
Code de la classe de stockage
3 - Flammable liquids
Classe de danger pour l'eau (WGK)
WGK 3
Point d'éclair (°F)
89.6 °F - closed cup
Point d'éclair (°C)
32 °C - closed cup
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Can imidazole be used with HIS-Select® Nickel Affinity Gel, Product P6611?
1 answer-
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Why won't my recombinant protein with a histidine-containing tag bind to HIS-Select® Nickel Affinity Gel, Product P6611?
1 answer-
Verify the pH and composition of sample and equilibration buffers. Make sure there are no chelating or reducing agents present in the extraction buffer. If using the batch mode, remove imidazole. Run the affinity purification under denaturing conditions. Run a Western blot of the extract to verify that the recombinant protein is present.
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Can I use SDS with HIS-Select® Nickel Affinity Gel, Product P6611?
1 answer-
0.1% SDS has been used with some samples, with no adverse effects on the observed protein binding. However, SDS will effectively coat proteins and may block the binding to the column. It is probably very protein-specific and an SDS concentration that works for one protein may not work for another.
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What needs to be done if the HIS-Select® Nickel Affinity Gel, Product P6611, resin turns brown on reuse?
1 answer-
During purification many protein extracts tend to discolor an affinity gel during the loading step. The original color will return after the wash or elution step. If the color is still not changing strip and recharge the affinity gel with nickel. Wash with EDTA and recharge with Nickel solution.
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What is the Department of Transportation shipping information for this product?
1 answer-
Transportation information can be found in Section 14 of the product's (M)SDS.To access the shipping information for this material, use the link on the product detail page for the product.
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Can Tris buffers be used instead of phosphate buffer for HIS-Select® Nickel Affinity Gel, Product P6611?
1 answer-
Yes, Tris buffers should work.
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