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Uracile-ADN glycosylase

recombinant from E. coli K 12

• Synonyme(s) : PCR, UDG
• Code UNSPSC : 41106300

Propriétés

• Produit recombinant: expressed in E. coli
• Niveau de qualité: 100
• Forme: solution
• Conditionnement: pkg of 100 U
• Fabricant/nom de marque: Roche
• Concentration: 1000 U/mL
• Technique(s): PCR: suitable; mutagenesis: suitable
• Couleur: colorless
• pH: 7.9-8.1 (68 °F)
• Solubilité: water: miscible
• Adéquation: suitable for molecular biology
• Application(s): life science and biopharma
• Activité étrangère: RNases 10 units, none detected; endonuclease 20 units, none detected
• Température de stockage: −20°C

Description

Description générale

L'uracile-ADN glycosylase (UNG) contient la forme recombinante extrêmement active de l′enzyme du même nom présente dans les procaryotes et les eucaryotes. Elle hydrolyse les liaisons glycosidiques avec l′uracile dans l′ADN simple ou double brin, retirant l′uracile et créant des sites abasiques sensibles aux alcalis au sein de l′ADN. Ces sites abasiques peuvent être hydrolysés sous l'effet d'une endonucléase, de la chaleur ou d'un traitement alcalin. En fonction du mode de préparation de l′ADN, l′uracile-ADN glycosylase peut servir à réaliser des clivages de l′ADN-U de type général, spécifiques à un site ou spécifiques à un brin.

Spécificité

• L'uracile-ADN glycosylase hydrolyse les liaisons glycosidiques avec l'uracile des sites d'ADN-U de l'ADN simple brin ou double brin, retirant l'uracile et créant des sites abasiques sensibles aux alcalis au sein de l'ADN.
• L′enzyme est plus active sur l′ADN simple brin que sur l′ADN double brin.
• Une activité a également été observée sur de petits oligonucléotides d′ADN-U et sur le dUMP (Duncan, observations non publiées).
• L'uracile-ADN glycosylase est inactive sur l'ARN et l'ADN natif dépourvu d'uracile.

Inactivation à la chaleur : 95 °C pendant 10 min
L′uracile-ADN glycosylase reste partiellement active (<10 %) après une incubation de 30 minutes à 95 °C.

Application

L'uracile-ADN glycosylase peut être utilisée pour cliver l'ADN au niveau des sites comprenant un résidu désoxyuridylate. L′ADN-U peut être préparé à l′aide de méthodes in vitro telles que la PCR. En fonction du mode de préparation de l′ADN, l′uracile-ADN glycosylase peut servir à réaliser des clivages de type général, spécifiques à un site ou spécifiques à un brin. L'uracile-ADN glycosylase peut donc vous aider à :

• Empêcher les contaminations croisées en PCR.
• Augmenter l′efficacité des procédures de mutagénèse dirigée.
• Étiqueter des sondes oligonucléotidiques.

Qualité

L′activité de prévention des contaminations croisées est évaluée en ajoutant environ 10⁵ dU contenant des matrices avant la réaction d′amplification. Après traitement à l'UNG, aucun produit d'amplification n'a pu être détecté. L′enzyme ne contient aucune endonucléase ou exonucléase contaminante et est testée afin de confirmer l'absence de RNases.

Définition de l'unité

Une unité est définie comme la quantité d′uracile-ADN glycosylase nécessaire pour dégrader entièrement 1 μg d′ADN simple brin à base d′uracile purifié (bactériophage M13, cultivé dans E. coli sur CJ 236 dut-ung-) à +37 °C pendant 60 minutes.
Une unité Lindahl est définie comme la quantité d'enzyme nécessaire pour libérer 1 μmol d′uracile en 1 minute à 37 °C. Une unité Lindahl correspond à 520 000 U d′après notre définition de l′unité.

Activité volumique : 1 U/μl

Forme physique

L′enzyme est fournie sous la forme d′une solution à1 U/μl dans du tampon de conservation.

Stockage et stabilité

Congélation possible (après la synthèse d'ADN).

Autres remarques

Produit destiné uniquement à la recherche en sciences de la vie. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.

Informations sur la sécurité

• Code de la classe de stockage: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): WGK 1
• Point d'éclair (°F): No data available
• Point d'éclair (°C): No data available