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Phosphorylation of filamin A by Cdk1 regulates filamin A localization and daughter cell separation.

Experimental cell research (2014-12-03)
Sandy G Y Szeto, Elizabeth C Williams, Adam D Rudner, Jonathan M Lee
RÉSUMÉ

In cell culture, many adherent mammalian cells undergo substantial actin cytoskeleton rearrangement prior to mitosis as they detach from the extracellular matrix and become spherical. At the end of mitosis, the actin cytoskeleton is required for cytokinesis and the reassembly of interphase structures as cells spread and reattach to substrate. To understand the processes regulating mitotic cytoskeletal remodeling, we studied how mitotic phosphorylation regulates filamin A (FLNa). FLNa is an actin-crosslinking protein that was previously identified as a cyclin-dependent kinase 1 (Cdk1) binding partner and substrate in vitro. Using quantitative label-based mass spectrometry, we find that FLNa serines 1084, 1459 and 1533 are phosphorylated in mitotic HeLa cells and all three sites match the phosphorylation consensus sequence of Cdk1. To investigate the functional role of mitotic FLNa phosphorylation, we mutated serines 1084, 1459 and 1533 to nonphosphorylatable alanine residues and expressed GFP-tagged FLNa(S1084A,S1459A,S1533A) (FLNa-AAA GFP) in a FLNa-deficient human melanoma cell line called M2. M2 cells expressing FLNa-AAA GFP have enhanced FLNa-AAA GFP and actin localization at sites of contact between daughter cells, impaired post-mitotic daughter cell separation and defects in cell migration. Therefore, mitotic phosphorylation of FLNa is important for successful cell division and interphase cell behavior.

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Sigma-Aldrich
Acétonitrile, suitable for HPLC, gradient grade, ≥99.9%
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Sigma-Aldrich
Acétonitrile, HPLC Plus, ≥99.9%
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Sigma-Aldrich
Acide formique, reagent grade, ≥95%
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Sigma-Aldrich
Bicarbonate de sodium, ACS reagent, ≥99.7%
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Sigma-Aldrich
Acide formique, ACS reagent, ≥96%
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Sigma-Aldrich
Bicarbonate de sodium, powder, BioReagent, for molecular biology, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture
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Acétonitrile, ACS reagent, ≥99.5%
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Sigma-Aldrich
Bicarbonate de sodium, ReagentPlus®, ≥99.5%, powder
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MOPS, ≥99.5% (titration)
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Sigma-Aldrich
Acétonitrile, suitable for HPLC, gradient grade, ≥99.9%
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Sigma-Aldrich
Fluorure de phénylméthanesulfonyle, ≥98.5% (GC)
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Sigma-Aldrich
BIS-TRIS, ≥98.0% (titration)
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Pyruvate de sodium, powder, BioReagent, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture, ≥99%
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Sigma-Aldrich
Bicarbonate de sodium, anhydrous, free-flowing, Redi-Dri, ACS reagent, ≥99.7%
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Sigma-Aldrich
Acide formique, ACS reagent, ≥88%
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Sigma-Aldrich
MOPS, BioPerformance Certified, suitable for cell culture, ≥99.5% (titration)
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Sodium phosphate, 96%
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Acide éthylènediaminetétraacétique solution, 0.02% in DPBS (0.5 mM), sterile-filtered, BioReagent, suitable for cell culture
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Sigma-Aldrich
Ethylenediaminetetraacetic acid, anhydrous, crystalline, BioReagent, suitable for cell culture
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Sigma-Aldrich
Ethylenediaminetetraacetic acid, 99.995% trace metals basis
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Sigma-Aldrich
Bicarbonate de sodium, puriss., meets analytical specification of Ph. Eur., BP, USP, FCC, E500, 99.0-100.5%, powder
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Sigma-Aldrich
Fluorure de phénylméthanesulfonyle, ≥99.0% (T)
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Sigma-Aldrich
MOPS, BioXtra, ≥99.5% (titration)
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Sigma-Aldrich
Pyruvate de sodium, Hybri-Max, powder, suitable for hybridoma
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Sigma-Aldrich
Acétonitrile, biotech. grade, ≥99.93%
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Sigma-Aldrich
Pyruvate de sodium, powder, BioXtra, suitable for mouse embryo cell culture
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Quantité
Sigma-Aldrich
BIS-TRIS, BioUltra, ≥99.0% (NT)
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Sigma-Aldrich
Acétonitrile, anhydrous, 99.8%
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Sigma-Aldrich
BIS-TRIS, BioPerformance Certified, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture, ≥98.0%
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USP
Bicarbonate de sodium, United States Pharmacopeia (USP) Reference Standard
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