Protokoll für RNase, DNase-frei

Produktnr.: 11119915001

Protokoll

Bedingungen für den RNase-Aufschluss

0,1 mE RNase, DNase-frei baut in 30 min bei 37 °C in einem Reaktionsvolumen von 50 µl Wasser in PCR-Qualität 1 µg RNA ab. Die Proteinkonzentration von RNase, DNase-frei beträgt 0,5 µg/µl. Die spezifische Aktivität des Enzyms beträgt 30 E/mg, was 1,5 mE/µl entspricht. Ein Mikroliter der RNase-Aufbereitung reicht aus, um 15 µg RNA innerhalb von 30 min vollständig abzubauen. Da die exakte Konzentration von RNA in biologischen Proben nicht genau bekannt ist und man die RNA in der Regel quantitativ abbauen will, wird ein Überschuss von RNase empfohlen.

RNasen haben keine besonderen Anforderungen an Reaktionspuffer; sie sind in reinem Wasser und in Gegenwart von Tris oder NaCl aktiv.

Um RNA aus Ihren Proben zu entfernen, fügen Sie RNase, DNase-frei hinzu und inkubieren Sie bei entweder +15 bis +25 °C oder bei +37 °C.

Geben Sie beispielsweise 0,5 µl RNase zu den Nukleinsäuren aus 10⁶ Zellen und inkubieren Sie bei +15 bis +25 °C oder bei +37 °C. Geben Sie zu Nukleinsäuren aus 10⁷ Zellen 1,5 µl RNase und inkubieren Sie für 30 min bei +37 °C. Geben Sie zu Nukleinsäuren aus 10⁸ Zellen 16 µl RNase und inkubieren Sie für 30 min bei +37 °C.