MAB3391

Anti-Collagen Type I (COL1A1) Antibody

CHEMICON^®, mouse monoclonal, 5D8-G9

• Synonym(e): Anti-CAFYD, Anti-EDSARTH1, Anti-EDSC, Anti-OI1, Anti-OI2, Anti-OI3, Anti-OI4
• UNSPSC Code: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.41
• Clone: 5D8-G9, monoclonal
• Species reactivity: pig, canine, sheep, human, bovine
• Application: ELISA, FACS, IHC, WB
• Citations: 51

Eigenschaften

• Produktname: Anti-Kollagen-Typ-I-Antikörper, Klon 5D8-G9, clone 5D8-G9, Chemicon^®, from mouse
• biological source: mouse
• Quality Segment: 100
• antibody form: purified immunoglobulin
• antibody product type: primary antibodies
• clone: 5D8-G9, monoclonal
• species reactivity: pig, canine, sheep, human, bovine
• should not react with: guinea pig, ground squirrel, rat, kangaroo, horse, chicken, mouse
• manufacturer/tradename: Chemicon^®
• technique(s): ELISA: suitable, flow cytometry: suitable, immunohistochemistry: suitable, western blot: suitable
• isotype: IgG1
• NCBI accession no.: NM_000088.3
• UniProt accession no.: P02452
• shipped in: wet ice
• target post-translational modification: unmodified
• Gene Information: human ... COL1A1(1277)

Beschreibung

General description

Kollagene sind im Laufe der Evolution in hohem Maße konserviert und zeichnen sich durch eine ununterbrochene „Glycin-X-Y“-Triplett-Wiederholung aus, die ein notwendiger Teil der dreifachen Helixstruktur ist. Kollagen Typ I (95 kDa) kommt in Knochen, Hornhaut, Haut und Sehnen vor. Mutationen des kodierenden Gens sind mit Osteogenesis imperfecta, Ehlers-Danlos-Syndrom und idiopathischer Osteoporose assoziiert. Reziproke Translokationen zwischen den Chromosomen 17 und 22, auf denen sich dieses Gen und das Gen für PDGF-beta (Wachstumsfaktor Beta aus Thrombozyten) befinden, sind mit einem bestimmten Typ von Hauttumor, dem so genannten Dermatofibrosarcoma protuberans, assoziiert, der auf eine ungeregelte Expression des Wachstumsfaktors zurückzuführen ist.

Application

Dieser Anti-Kollagen-Typ-I-Antikörper (Klon 5D8-G9) wurde für die Verwendung in ELISA, FC, WB und IH zum Nachweis von Kollagen Typ I validiert.

ELISA: Nachweis von nativem Typ-I-Kollagen. Capturing: 2–4 μg/ml; Nachweis: Mit einer Verdünnung des Anti-Kollagen-Typ-I-Antikörpers auf 10 μg/ml werden 50 ng humanes Kollagen Typ I ohne Reaktivität mit anderen Kollagenen nachgewiesen. Zum Nachweis niedrigerer Kollagen-Konzentrationen sind eventuell höhere Antikörper-Konzentrationen erforderlich. Es ist zu beachten, dass der Antikörper nicht an sich selbst bindet.

Immunhistochemie: unfixierte gefrorene Gewebeschnitte:

Mit einem Gefriermikrotom 6 μm dicke Schnitte gefrorener Proben herstellen. Gründlich an der Luft trocknen lassen. Mit PBS rehydrieren. Für IF-Untersuchungen ist in der Regel keine Blockierung erforderlich. Wenn DAB verwendet wird, empfiehlt sich eine Vorbehandlung für Peroxidase. Außerdem reduziert eine Blockierung mit 2 % BSA in PBS Hintergrund.

Den Anti-Kollagen-Typ-I-Antikörper in PBS-Puffer verdünnen, zu den Proben geben und 60 Minuten lang inkubieren. (1:100–1:500).

Die Schnitte zweimal 10 Minuten lang in PBS waschen. FITC-konjugierten Anti-Maus-Antikörper zugeben und 60 Minuten lang inkubieren.

Zweimal 10 Minuten lang in PBS waschen.

Die Schnitte in 1 mmol/l-1,4-Phenylendiamin-haltigem Glycerin/Wasser (9:1 v/v) eindecken. (Für FITC-Stabilität oder Chemicon-Katalognummer 5096 oder 5013 verwenden.)

HINWEIS:

Vorläufige Studien deuten darauf hin, dass durch Vorbehandlung (vor Schritt 2) der Schnitte mit verschiedenen Enzymen (z. B. 0,1 % Pepsin in 0,1 mol/l HCl, bei 37 °C 5 Minuten lang) eine verstärkte Färbung bestimmter Gewebe erzielt werden kann.

Durchflusszytometrie: 1:100

Immunblotting: 1:1000 unter ausschließlicher Verwendung NATIVER, nichtdenaturierter, nichtreduzierter Western Blots. Ramshaw, et al. (1988) „Electrophoretic and electroblotting of native collagens“. Anal. Biochem. 168:82–87. Antikörper funktionieren in herkömmlichen reduzierten Western Blots nicht.

Kurzzeitig müssen für die Analyse nativer Kollagene PAGE-Gele hergestellt werden.

Ein Trenngel mit insgesamt 3 % (w/v) Acrylamid, das als Vernetzungsmittel 3,2 % (w/w) Bisacrylamid als Anteil eines Monomers enthält, in 10 mmol/l Calciumlactat (pH-Wert 6,8) wird zwischen vertikalen Glasplatten durch Zugabe von 0,05 bis 0,1 % TEMED und 0,05 bis 0,1 % Ammoniumpersulfat (zugegeben aus einer 10 %igen Stammlösung) polymerisiert. Als Kathodenpuffer (negativ) dient 50 mmol/l Tris (mittels Milchsäure eingestellt auf den pH-Wert 6,6), als Anodenpuffer (positiv) 0,1 mol/l Milchsäure mit dem pH-Wert 2,5 {Friis, SJ et al, 1985 J Biochem Biophys Methods 10:301–306}.

Vor dem Laden der Probe wird das Gel bei 100 V mindestens 90 Minuten lang laufen gelassen. Kollagenproben zu 1 mg/ml werden in 0,1 mol/l Milchsäure oder 0,1 mol/l Essigsäure mit 10 % Saccharose gelöst und je Bahn werden 5 bis 10 μg geladen. Methylgrün wird nach Bedarf zum Laden unterstützend zugegeben. Die Elektrophorese erfolgt bei 70 V und Raumtemperatur 5 Stunden lang.

Das Blotting wird mit 0,1 mol/l Milchsäure, pH-Wert 2,5, bei 20 V und Raumtemperatur 16 Stunden lang durchgeführt, wobei die Kollagene in Richtung Kathode wandern.

Forschungskategorie
Zellstruktur

Forschungsunterkategorie
EZM-Proteine

Biochem/physiol Actions

Der Anti-Kollagen-Typ-I-Antikörper ist ein monoklonaler IgG1-Antikörper, der ein Epitop in der Nähe des C-Terminus von Kollagen Typ I bindet.

Der Anti-Kollagen-Typ-I-Antikörper weist eine hohe Affinität für Typ-I-Kollagene des Menschen, des Rindes und des Schafes auf. Es liegen keine Hinweise auf eine Kreuzreaktivität mit Kollagen Typ III, V und VI oder mit Bindegewebsprotein vor. Der Antikörper reagiert nur mit nativem, nichtdenaturiertem Kollagen I.

Physical form

100 μg aufgereinigter Antikörper in einer Konzentration von 1 mg/ml in 50 mM Tris-Acetat, 150 mM NaCl.

Die Immunglobulinfraktion wurde mittels Protein-A-Chromatographie aufgereinigt und weist gemäß Coomassie-PAGE eine Reinheit von > 95 % auf. Der Anti-Kollagen-Typ-I-Antikörper wird vorfiltriert (Porengröße: 0,22 µm) geliefert.

Format: Aufgereinigt

Preparation Note

Der Anti-Kollagen-Typ-I-Antikörper wird in flüssiger Form ungekühlt versendet. Dieses Material ist bei 2–8 °C bis zu 6 Monate haltbar.

WARNUNG: Die monoklonale Reagenzlösung enthält 0,1 % Natriumazid als Konservierungsmittel. Aufgrund möglicher Gefährdungen durch Ansammlung dieses Materials in Rohren sollte verbrauchtes Reagenz mit großzügigen Wassermengen entsorgt werden.

Analysis Note

Kontrolle
Humanes Nierenlysat

Legal Information

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Sofern in unserem Katalog oder anderen Begleitdokumenten unserer Produkte nicht anders angegeben, sind unsere Produkte nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für andere Zwecke zu verwenden, einschließlich, jedoch nicht beschränkt auf unautorisierte kommerzielle Verwendung, zur In-vitro-Diagnostik, für Ex-vivo- oder In-vivo-Therapiezwecke oder jegliche Art der Einnahme oder Anwendung bei Menschen oder Tieren.

Sicherheitshinweise

• Lagerklasse: 12 - Non Combustible Liquids
• Was ist los?: WGK 2
• Flammpunkt (°F): Not applicable
• Flammpunkt (°C): Not applicable