CBA410

EZMTT Zellproliferations-Assay, MTT-basiert, 200 X

A novel tetrazolium salt based proliferation assay for continous monitoring of growth in mammalian and bacterial cell culture.

• NACRES: NA.84
• UNSPSC Code: 12352207

Eigenschaften

• detection method: colorimetric

Beschreibung

General description

NAD+/NADH und NADP+/NADPH sind wichtige biologische Co-Faktoren für Oxidoreduktaseenzyme, die grundlegend für viele biologische Prozesse wie Energiestoffwechsel, Mitochondrienfunktion, oxidativen Stress, Immunfunktionen und Zelltod sind. Somit dienen die Oxidoreduktaseenzyme als Indikatoren der metabolischen Aktivität von Zellen.

EZMTT ist ein neuartiges monosulfoniertes Tetrazoliumsalz: 2-(3-(2-Methoxy-4-nitrophenyl)-2-(4-nitrophenyl)-2H-tetrazol-3-ium-5-yl)benzolsulfonat-natriumsalz (EZMTT). Die EZMTT-Reagenzien bieten einen hochwertigen und reproduzierbaren Nachweis für Oxidoreduktaseenzyme, Indikatoren der zellulären metabolischen Aktivität. Bei der Umsetzung mit metabolischen Enzymen wird EZMTT zu einem gelblichen Formazan umgewandelt, das keinen Solubilisierungsschritt erfordert und bei einer Absorption von 450 nm gemessen werden kann. Der EZMTT-Assay überwacht die Zellproliferation und misst die Zytotoxizität (Verlust lebensfähiger Zellen) oder zytostatische Aktivität (Übergang von Proliferation zu Quieszenz) von potenziellen medizinischen oder toxischen Mitteln kontinuierlich.

Traditionelle Tetrazoliumsalze wie MTT reagieren mit NAD(P)H-abhängigen zellulären Oxidoreduktaseenzymen, um ein unlösliches Formazan zu bilden, das eine Solubilisierung erfordert, eine geringere Sensitivität aufweist und ein Endpunkt-Assay ist.

<bold>Eigenschaften und Vorteile von EZMTT:</bold>
• Kann mit allen Medien vorgemischt und anschließend direkt zu den Zellen gegeben werden
• Ist sehr stabil mit geringer Zytotoxizität. Die Inkubationszeit hängt von der Anzahl geprüfter Zellen ab; wenn der Farbunterschied in Kulturen mit/ohne Zellen nicht ersichtlich ist, ist eine längere Inkubation von Stunden bis Wochen möglich.
• Die Reduktion von EZMTT erzeugt einen wasserlöslichen gelben Farbstoff, der keinen Solubilisierungsschritt erfordert
• Sensitiver als die traditionellen MTT-Assays und kann das Zellwachstum (Säugetier- und Bakterienzellen) durch eine Absorption bei 450 nm oder Farbumschläge leicht überwachen. Durch längere Inkubationszeiten kann selbst 1 Bakterienzelle nachgewiesen werden.
• Deutlich weniger reaktiv als andere Antioxidantien wie beta-Mercaptoethanol (BME)

Assay-Protokoll
1. HeLa-Zellen ablösen und in jedem Well einer 96-Well-Mikrotiterplatte mit 10 % FBS DMEM (100 μl) eine andere Zellanzahl (0, 2.500, 5.000, 10.000, 20.000, 30.000, 40.000, 50.000) in dreifacher Ausführung impfen.
2. Bei 37 °C, 5 % CO2 für 3–4 Stunden oder über Nacht inkubieren.
3. Tauen Sie die 200X-EMZTT-Zellproliferations-Assay-Lösung auf und mischen sie mit Nährmedien (20-fache Verdünnung).
4. Geben Sie 10 μl der 10X-EZMTT-Lösung in jeden Well der Platte (200-fache Endverdünnung).
5. Inkubieren Sie die Platte für 1-4 Stunden in dem Inkubator, messen Sie die Absorption bei 450 nm mit einem Mikrotiterplatten-Lesegerät.

Preparation Note

Lagern Sie den EZMTT-Zellproliferations-Assay bei -20 °C und lichtgeschützt.

Disclaimer

Sofern in unserem Katalog oder anderen Begleitdokumenten unserer Produkte nicht anders angegeben, sind unsere Produkte nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für andere Zwecke zu verwenden, einschließlich, jedoch nicht beschränkt auf unautorisierte kommerzielle Verwendung, zur In-vitro-Diagnostik, für Ex-vivo- oder In-vivo-Therapiezwecke oder jegliche Art der Einnahme oder Anwendung bei Menschen oder Tieren.

Sicherheitshinweise

• Lagerklasse: 10 - Combustible liquids
• Was ist los?: WGK 2
• Flammpunkt (°F): 188.6 °F
• Flammpunkt (°C): 87 °C